高迁移率族蛋白B1单克隆抗体的制备及其在竞争ELISA中的应用

论文摘要

目的制备HMGB1单克隆抗体并建立HMGB1的竞争ELISA测定方法。方法用bis（sulfosuccinimidyl）suberate制备HMGB1-BSA偶联物（HMGB1-BSA）和HRP标记的HMGB1（HMGB1-HRP）；以完全佐剂乳化的HMGB1-BSA免疫Balb／c小鼠；用50％PEG使小鼠脾细胞与Sp2／0细胞融合；用有限稀释法克隆杂交瘤细胞；用DE52离子交换色层析柱纯化单克隆抗体；用静脉注射链尿菌素法建立大鼠糖尿病模型。结果在120个孔内，发现17个孔内有分泌HMGB1单克隆抗体的杂交瘤细胞生长。对其中A6-Ⅲ孔内杂交瘤细胞用有限稀释法克隆化，共获得7株分泌HMGB1特异性抗体的杂交瘤细胞株。用其中一株杂交瘤（HMGB1-C1株）制备了纯化HMGB1单克隆抗体。利用HMGB1-BSA和HMGB1-HRP建立的竞争ELISA的测定范围为1～320ng／mL，回收率为97～106％，变异系数为2.6～7.3％。用该竞争ELISA测定正常和糖尿病大鼠血清HMGB1水平发现糖尿病大鼠血清HMGB1水平显著高于正常大鼠。结论以HMGB1单克隆抗体建立的竞争ELISA有望成为一种具有灵敏度高、特异性强，重复性好，操作简便和快速的测定方法。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 引言
• 第一部分小鼠的免疫
• （一） HMGB1的修饰
• （二） 免疫方法
• （三） 小鼠血清抗HMGB1-BSA抗体的测定
• （四） 结果
• （五） 小结
• （六） 附表
• 第二部分 HMGB1单克隆抗体的制备—细胞融合
• （一） 细胞融合
• （二） 上清液HMGB1抗体活性的测定
• +杂交瘤细胞的克隆化（A6-III）'>（三） HMGB1⁺杂交瘤细胞的克隆化（A6-III）
• （四） 小结
• 第三部分 HMGB1单克隆抗体的纯化
• （一） 腹水的制备
• （二） 腹水抗体效价及特异性的测定
• （三） 抗体的纯化
• （四） 结果
• （五） 小结
• 第四部分 HMBGI竞争ELIAS
• （一） HMGB1竞争ELISA基本技术路线
• （二） HMGB1单克隆抗体包被浓度及HMGB1-HRP结合物稀释度
• （三） HMGB1竞争ELISA的测定范围
• （四） HMGB1竞争ELISA的回收率和变异系数
• 第五部分 糖尿病大鼠血清HMGB1的测定
• （一） 材料
• （二） 方法
• （三） 结果
• （四） 小结
• （五） 附表
• 第六部分 讨论
• 第七部分 参考文献
• 第八部分 HMGB1的免疫学研究进展（综述）
• 致谢
• 附录一 所用试剂配制
• 附录二 英文缩略词对照表
• 附录三 本研究论文发表影印件