γ-氨基丁酸对断喙后雏鸡免疫功能及细胞凋亡相关基因表达的影响

论文摘要

为研究γ-氨丁酸（GABA）对断喙应激条件下雏鸡免疫功能及其脾脏瘤坏死因子-α（Tumor necrosis factor-α,TNF-α）白细胞介素-1β （Interleukin-1β, IL-1β）、白细胞介素-6（Interleukin-6, IL-6）和细胞凋亡相关基因Bcl-2、Fas基因mRNA表达量的影响,进行如下试验,旨在探索缓解断喙应激的方法。试验设计选取1日龄体重均匀的健康固始鸡公雏360只,随机分为A、B、C、D、E5个组,每组6个重复。其中A、B、C为断喙组,饮水中分别添加40mg/kg、60mg/kg和80mg/kg水平GABA;D组不断喙,不添加GABA;E组断喙,不添加GABA。7日龄断喙,于断喙后1d、3d、5d、7d心脏采血,处死,分离出免疫器官。试验一γ-氨基丁酸对断喙后雏鸡免疫功能的影响于断喙后的1d、3d、5d、7d从每个处理每重复取2只鸡,称活体重,心脏采血,分离血清,-20℃保存,采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测促肾上腺皮质激素（ACTH）、CD3+CD4+、IgG、TNF-α、IL-1β和IL-6血清中的含量；分离免疫器官并称重,计算免疫器官指数。结果表明：断喙对雏鸡造成一定应激,断喙组雏鸡血清ACTH水平明显高于未断喙组,而添加GABA显著下调雏鸡血清ACTH水平（P<0.05）；添加80mg/kg GABA显著提高了脾脏指数,不同处理对雏鸡胸腺指数和法氏囊指数无显著影响；此外,添加GABA显著提高了CD3+和CD4+水平；不同水平GABA对断喙后雏鸡血清1gG水平无显著影响；断喙应激引起了1L-1β、1L-6和TNF-α.清中含量的升高,断喙后第1、5天血清中1L-1β水平显著高于未断喙组,添加80mg/kg GABA显著降低了血清中1L-1β含量；与未断喙组相比,断喙后第1和17天血清TNF-α和IL-6含量均显著升高,添加：80mg/kg GABA后显著降低。试验二γ-氨基丁酸对断喙后雏鸡脾脏细胞因子及细胞凋亡相关基因表达量的影响于免疫后的1d、3d、5d和7d从每个处理每重复取2只鸡,分离脾脏,提取总RNA,反转录出cDNA,用SYBR Green I做染料,以GAPDH为参照基因,采用实时荧光定量PCR法检测IL-I、IL-6和TNF-α的相对表达量以及抗凋亡基因Bcl-2和促凋亡基因Fas的相对表达量。结果表明：断喙后第1、5天,添加80mg/kg GABA显著降低了IL-Iβ脾脏中的表达（P<0.05）；断喙应激造成雏鸡脾脏中TNF-α的表达量显著升高,断喙后第1、5天,添加GABA组脾脏中TNF-α的表达量显著低于断喙未添加GABA组（P<0.05）；此外,断喙后第3天,添加80mg/kg GABA组雏鸡脾脏中IL-6的表达量显著低于断喙未添加GABA组（p＜0.05）；断喙应激后第1、3、7天脾脏中促凋亡基因Fas mRNA表达量显著高于未断喙组,添加GABA后下降,且随GABA剂量加大而进一步降低,添加80mg/kg GABA可轻度上调抗凋亡基因Bcl-2mRNA表达。

论文目录

• 致谢
• 摘要
• 1 文献综述
• 1.1 应激
• 1.1.1 应激的概念
• 1.1.2 应激的分类
• 1.1.3 应激的危害
• 1.1.4 应激与免疫系统
• 1.1.5 应激与细胞因子
• 1.1.6 应激与细胞凋亡
• 1.1.7 细胞凋亡的主要调控基因
• 1.1.8 应激的预防
• 1.2 γ-氨基丁酸及其应用
• 1.2.1 γ-氨基丁酸的理化性质
• 1.2.2 γ-氨基丁酸的生物学作用
• 1.2.3 γ-氨基丁酸在动物中的应用
• 1.3 本研究的目的及意义
• 2 引言
• 3 试验一 γ-氨基丁酸对雏鸡断喙后免疫功能的影响
• 3.1 材料与方法
• 3.1.1 试验动物及分组
• 3.1.2 试剂与仪器
• 3.1.3 样品制备
• 3.1.4 血清学检测
• 3.1.5 数据处理
• 3.2 结果与分析
• 3.2.1 不同水平GABA对雏鸡断喙后免疫器官指数的影响
• 3.2.2 GABA对雏鸡断喙后血清ACTH的影响
• 3.2.3 GABA对雏鸡断喙后血清IgG及T淋巴细胞亚群的影响
• 3.2.4 GABA对雏鸡断喙后血清中细胞因子含量的影响
• 3.3 讨论
• 3.4 小结
• 4 试验二 γ-氨基丁酸对断喙后雏鸡脾脏细胞因子及细胞凋亡相关基因表达量的影响
• 4.1 材料与方法
• 4.1.1 实验动物及分组
• 4.1.2 试剂与仪器
• 4.1.3 样品采集
• 4.1.4 总RNA的提取与纯化
• 4.1.5 cDNA的合成反应
• 4.1.6 目的基因引物的合成与检测
• 4.1.7 PCR产物的回收及测序
• 4.1.8 荧光定量PCR反应
• 4.1.9 数据分析
• 4.2 结果与分析
• 4.2.1 总RNA的质量
• 4.2.2 反转录产物及引物特异性的检测
• 4.2.3 γ-氨基丁酸对断喙后雏鸡脾脏IL-Iβ、IL-6和TNF-α基因表达量的影响
• 4.2.4 γ-氨基丁酸对断喙后雏鸡脾脏细胞凋亡相关基因表达量的影响
• 4.3 讨论
• 4.4 小结
• 5 结论
• 参考文献
• Abstract
• 附录