论文摘要
目的:掌握角质形成细胞培养的技术,了解细胞的生长特性;表皮生长因子在不同浓度条件下对角质形成细胞的增殖影响,以及表皮生长因子对角质形成细胞有无异常分化的作用。方法:用体外角质形成细胞的原代培养技术,用7组不同浓度的表皮生长因子干预体外培养的细胞,噻唑兰（MTT）法检测细胞的活性;选择最适浓度表皮生长因子干预的角质形成细胞用流式细胞仪检测DNA倍体情况。结果:原代培养的角质形成细胞膜片在12天左右形成,可见清晰的细胞间隙;选择进入对数生长期的细胞在rhEGF浓度为0.01μg/L～100μg/L时和对照组相比P<0.05,具有统计学差异,OD值为0.330±0.014～0.400±0.018,提示此浓度下对角质形成细胞有增殖作用,0.1—1μg/L下增殖最强;在500μg/L和0.001μg/L下与对照组相比P>0.05,无统计学差异,OD值为0.251±0.025提示无明显增殖作用;流式细胞仪检测在1μg/L下无细胞倍体异常的情况,在G1+S期,提示为二倍体。结论:表皮生长因子浓度为0.01μg/L—100μg/L时,提示该浓度下促角质形成细胞增长明显,在促增殖范围内无致细胞染色体异常分化的作用,细胞多数为G1+S期,提示此条件下角质形成细胞具有很强的增生能力。根据细胞培养显微观察rhEGF在500μg/L时,对角质形成细胞有明显的抑制作用,0.001μg/L为最低有效浓度。rhEGF对细胞生长周期无影响。
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