bFGF在慢性高眼压动物模型中对视网膜神经节细胞及视神经的保护作用

论文摘要

目的:研究在兔慢性高眼压动物模型中,碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对视网膜神经节细胞及视神经的保护作用。方法:健康新西兰大白兔13只（26眼）,随机分为实验组（12只,12眼）和对照组（12只,12眼）,用前房注射羟丙基甲基纤维素（HPMC）法制成慢性高眼压动物模型。每只兔随机一眼为实验组,分别于建模同时及建模后1周、2周、3周重复玻璃体腔内注射bFGF0.1ml（2000UbFGF溶于0.1ml,0.1mol/l的PBS中,PH为7.2）;另一眼为对照组,分别于建模同时及建模后1周、2周、3周玻璃体腔内注射等体积的PBS。另外一只兔不做任何注射为正常对照组（2眼）。术后每日固定时间测量眼压,如测IOP连续两日低于30mmHg,即重复行前房内注射2%HPMC。分别于建模同时及建模后第7、14、21、28天行眼底照相及全视野视网膜电图（F-ERG）检查。并分别于建模后7、14、21、28天随机处死3只兔子。完整摘出眼球行常规HE染色观察视网膜及视神经的形态变化并计数存活的神经节细胞数目。建模后28天行电镜观察视神经节细胞及视神经纤维超微结构的变化。结果:眼部表现:各组兔子术后均可见不同程度炎性反应,如结膜充血、角膜水肿等,术后7天均可消退。术后眼压:两组兔子术后眼压稳定,基本可以维持在30mmHg以上,平均持续6～7天。建模前后各时期对照组与实验组眼压比较无统计学意义（P＞0.05）。眼底改变:7d照相显示两组眼底尚正常;14d对照组可见视乳头凹陷开始加深、颜色变淡,血管开始出现移位;21d对照组视乳头凹陷明显扩大,血管明显屈膝,实验组可见视乳头凹陷加深,但血管尚无明显改变;28d时,对照组可见血管明显屈膝、变细,实验组开始出现血管屈膝现象。7天时间段实验组与对照组之间CD/DAR值比较或者分别与建模前比较均无统计学意义（P＞0.05）。从第14天开始实验组、对照组CD/DAR值分别较建模前增大且有统计学意义,并且实验组与对照组之间也存在统计学差异（P＜0.05）。电生理观察:在暗视视杆细胞反应、暗视视杆细胞—视锥细胞混合反应、暗视振荡电位、明视单次闪光视锥细胞反应及明视30Hz闪烁光视锥细胞反应5个全视野视网膜电图标准测试中可观察到:对照组均出现振幅降低,隐含期延长,Ops波及b波在7天出现具有统计学意义的改变,a波则在21天时出现统计学意义上的改变。7天后对照组均较实验组a波、b波、Ops总振幅降低,峰潜时延迟且存在统计学差异（P＜0.05）,对照组或实验组个时间段之间两两比较各振幅、峰潜时延迟程度随时间的延长均加重且存在统计学差异（P＜0.05）。病理学观察:光镜:正常对照组兔子视网膜显示清晰的结构:内界膜层、神经纤维层、神经纤维节细胞层、内丛状层、内核层、外丛状层、外核层。神经节细胞层节细胞分布均匀、紧密,形态、大小近似。视神经纤维排列整齐、间隔均匀。建模后7天开始,对照组视神经纤维层变薄,神经节细胞排列稀疏,数目较正常组下降（P＜0.05）;视神经纤维横切面可见胶质细胞排列紊乱、神经纤维肿胀,数目较正常组下降（P＜0.05）。实验组视神经纤维层尚无明显变化,神经节细胞及视神经计数较对照组的数目多,两组间比较有明显差异（P＜0.01）。第四周,实验组神经节细胞数目明显减少,且可见节细胞凋亡后剩余的固缩的细胞核。视神经纤维横断面可出现大量空泡,可见脱髓壳样变;但对照组几乎不能见到神经节细胞,可见视神经纤维大片坏死,胶质细胞增生。两组节细胞及神经纤维数目比较有非常显著性差异（P＜0.001）。内核层细胞层数仅约2～3层,细胞排列稀疏。RGCs减少率与ERG的关系中显示Ops波在RGCs减少20.12%时即出现统计学改变。电镜:术后28d可见对照组胞浆内细胞器数量减少、线粒体空泡变性、轴突排列紊乱、髓鞘变性;但实验组仍有散在细胞器、髓鞘相对不规则、轴突内微管和微丝肿胀、但不消失。结论:1.眼压、眼底照相、全视野视网膜电图及病理学改变证实慢性高眼压模型建模成功。2.在慢性高眼压模型中随着时间的延长,有明显的神经节细胞死亡及视神经纤维变性,提示高眼压为神经节细胞死亡及视神经纤维变性的一个重要原因。3.慢性高眼压动物模型中随着时间的延长,RGCs、Nf减少率,Ops波,b波较早出现统计学改变,其次是CD/DAR的统计学改变,a波最不敏感;Ops波是观察RGCs减少的最敏感的观察指标之一。4.在慢性高眼压动物模型中,bFGF对视网膜神经节细胞及视神经有部分的保护作用。

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