管花肉苁蓉作为药用植物的评价及有效组分的制备工艺初步研究

论文摘要

肉苁蓉为列当科植物肉苁蓉Cistanche deserticola Y.C.Ma.或管花肉苁蓉Cistanche tubulosa（Schrenk）R.Wight的干燥带鳞叶的肉质茎、咸而温,具有补肾阳、益精血、润肠通便和延缓衰老等功能。作为目前肉苁蓉的基源性植物,管花肉苁蓉已经有上千年的药用历史,由于其具有广泛的生物活性和可持续发展的原料来源,在功能性食品和药品领域的开发日益受到国内外学者的重视。为了更好的开发该产品,本论文从以下五个方面对肉苁蓉进行了系统的研究。首先,通过充分的文献调研,对管花肉苁蓉的生源、化学成分、药理作用,生产工艺等方面的研究进展进行了全面的综述,并对其市场前景进行了展望。肉苁蓉属植物在全世界约有22种,我国有6种,其中沙漠地区分布占5种,分别为荒漠肉苁蓉,管花肉苁蓉,盐生肉苁蓉,白花盐苁蓉和沙苁蓉。所含的化学成分主要有苯乙醇苷,环烯醚萜苷,木脂素苷类化合物及多种氨基酸。2005版中国药典记载肉苁蓉具有“补肾阳、益精血、润肠通便,用于阳痿、不孕、腰膝酸软、筋骨无力、肠燥便秘”的药理作用。现代药理学研究表明,肉苁蓉具有增强免疫,雄性激素样作用,通便,抗凋亡,抗氧化和抗衰老作用,对脑缺血再灌注损伤的保护,改善学习记忆等作用,此外还有抗败血症,感染性休克,保肝等作用。在提取工艺研究方面,文献记载了分别以苯乙醇苷,甜菜碱和肉苁蓉多糖为指标的最佳提取工艺研究。然后,采用反相高效液相色谱法对肉苁蓉药材和提取物中指标性成分,苯乙醇苷类成分松果菊苷和麦角甾苷进行了含量测定研究。选用甲醇超声提取40min为最佳提取方式,流动相为甲醇-乙腈-1%醋酸溶液（15:10:75）,检测波长334nm,流速0.8 ml·min-1,柱温:30℃,同时测定肉苁蓉中松果菊苷和麦角甾苷,分离度好,杂质峰干扰少,完全出峰时间在28min内。此外稳定性考察结果表明松果菊苷和麦角甾苷在避光、冷藏条件下一周内或避光、室温条件下12h稳定。结果表明,所建立的测定方法快速、准确、可靠。其次,采用反相高效液相色谱法,对市售肉苁蓉药材用甲醇提取,利用提取液进行了色谱指纹特征图的研究。实现了对肉苁蓉中14个化学成分色谱峰的分离,获取了反映该药材整体的化学数据,并将所获化学数据进行化学模式识别研究。用系统聚类分析,将肉苁蓉样品分为3类:优质品、一般品和劣质品;采用相关系数作为测度,进行相似度计算。结果表明,相似度在0.90～1.00为优质品,相似度在0.70～0.89为一般品,相似度低于0.70为劣质品。聚类分析和相似度计算结果是一致的。在分析未知样品时,只需计算未知样品与标准样本间的相似度,即可对未知样品进行鉴定、分类和评价。本研究建立了中药材肉苁蓉的质量评价方法,为科学评价中药材的质量作出了有意义的探索。再次,以松果菊苷和麦角甾苷的总得率为指标,结合大生产可行性,通过正交设计优选管花肉苁蓉中苯乙醇苷的提取工艺。实验结果表明,管花肉苁蓉以乙醇回流提取较为适宜,其中提取次数对实验结果有显著性影响。乙醇提取苯乙醇苷类的最佳提取工艺为:50%乙醇6倍量回流提取3次,每次2h。在此条件下,提取物浸膏得率为18%,松果菊苷和麦角甾苷含量总和为9.72%。本实验研究结果为肉苁蓉药材的工业化生产应用提供了工艺保证。最后,通过对6种大孔吸附树脂静态吸附、解吸性能的比较,确定D1400大孔吸附树脂作为苯乙醇苷类分离纯化的介质,通过梯度洗脱,获得了良好的分离纯化效果。先用5%～10%的乙醇洗脱除去部分杂质,再用50%乙醇洗脱,洗脱物经减压浓缩和真空烘干后进行测定,粉末中苯乙醇苷类含量为32.53%,符合国际市场对肉苁蓉提取物的标准。本实验研究结果为肉苁蓉药材中苯乙醇苷类的富集和纯化提供了参考。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 前言
• 第一章 管花肉苁蓉的研究进展
• 1.1 肉苁蓉资源种类
• 1.1.1 荒漠肉苁蓉
• 1.1.2 管花肉苁蓉
• 1.1.3 盐生肉苁蓉
• 1.1.4 白花盐苁蓉
• 1.1.5 沙苁蓉
• 1.2 管花肉苁蓉生源和鉴别
• 1.2.1 植物形态
• 1.2.2 显微特征
• 1.2.3 薄层色谱鉴别
• 1.2.4 含量测定
• 1.3 化学成分研究
• 1.4 药理作用研究
• 1.5 提取工艺
• 1.6 展望
• 第二章 肉苁蓉中苯乙醇苷类成分含量测定
• 2.1 肉苁蓉中指标性成分苯乙醇苷中活性成分的确定
• 2.2 肉苁蓉中指标性成分麦角甾苷和松果菊苷含量测定方法研究
• 2.3 肉苁蓉中麦角甾苷和松果菊苷含量的分析方法的确定
• 2.3.1 仪器、试剂和对照品
• 2.3.2 色谱条件的建立
• 2.3.3 提取方式的选择
• 2.3.4 系统适用性试验
• 2.3.5 标准曲线的绘制
• 2.3.6 样品溶液的制备
• 2.3.7 精密度试验
• 2.3.8 回收率
• 2.3.9 对照品溶液稳定性试验
• 2.3.10 样品含量测定
• 2.4 讨论
• 第三章 市售肉苁蓉药材HPLC指纹特征研究
• 3.1 绪论
• 3.1.1 中药指纹图谱的概况
• 3.1.2 中药指纹图谱的获得
• 3.2 仪器试剂和样品
• 3.2.1 仪器、试剂和对照品
• 3.2.2 样品收集与预处理
• 3.3 肉苁蓉药材HPLC分析
• 3.3.1 色谱条件
• 3.3.2 供试品溶液的制备
• 3.3.2.1 提取方法的考察
• 3.3.2.2 样品溶液的制备
• 3.3.3 检测波长的选择
• 3.3.4 流动相梯度的选择
• 3.3.5 精密度试验
• 3.3.6 样品溶液稳定性试验
• 3.4 市售肉苁蓉样品HPLC指纹特征图
• 3.5 肉苁蓉样品质量分级与评价方法的确立
• 3.5.1 肉苁蓉样品系统聚类分析
• 3.5.2 肉苁蓉样品相似度计算
• 3.6 结论
• 第四章 正交设计优选管花肉苁蓉中苯乙醇苷的提取工艺
• 4.1 绪论
• 4.2 仪器、试剂与对照品
• 4.2.1 仪器
• 4.2.2 试剂
• 4.2.3 对照品
• 4.3 提取工艺考察
• 4.3.1 样品准备
• 4.3.2 溶剂种类考察
• 4.3.3 乙醇浓度的单因素考察
• 4.3.4 正交试验优化提取工艺
• 4.4 讨论
• 第五章 大孔树脂法纯化管花肉苁蓉中苯乙醇苷类成分研究
• 5.1 仪器、材料、试剂和样品
• 5.1.1 仪器
• 5.1.2 材料
• 5.1.3 试剂
• 5.1.4 样品
• 5.2 实验方法
• 5.2.1 上样液的制备
• 5.2.2 树脂预处理
• 5.2.3 苯乙醇苷类检测方法
• 5.2.4 苯乙醇苷类静态饱和吸附量和吸附率
• 5.2.5 苯乙醇苷类解析率测定
• 5.2.6 动态吸附曲线的绘制
• 5.2.6.1 样品溶液的绘制
• 5.2.6.2 动态吸附
• 5.2.6.3 洗脱剂洗脱条件的选择
• 5.2.7 小试工艺验证
• 5.2.8 工艺优化
• 5.2.9 树脂多次再生后性能比较
• 5.3 结果与讨论
• 5.3.1 大孔树脂吸附量及选择性
• 5.3.2 大孔树脂的解析率
• 5.4 结论
• 全文总结
• 参考文献
• 附图
• 致谢
• 在学期间发表的论文