维甲酸下调Bcl-2的表达水平与腭裂形成的关系

论文摘要

目的:腭裂是人类常见的先天性发育畸形,给患者及其家庭带来了极大的痛苦。人们长期以来一直在探询着腭裂的发病机制,但因其影响因素十分复杂,涉及多个方面,因此腭裂的确切病因至今仍未明确。在研究腭裂病因学的过程中,如何建立一种稳定、有效的腭裂动物模型,已成为研究进一步深入的关键。由于腭突发育的复杂性,导致其对多种致畸物质的毒性作用具有极强的敏感性。在已知的能诱发腭裂的致畸物质中,维甲酸（retinoic acid,RA）是致畸作用比较显著的一种。目前,因其明确的能够诱导细胞分化作用而广泛应用于治疗皮肤病、白血病等症。尽管维甲酸诱导细胞凋亡的作用早已为人们所肯定,但这些结果都直接来自于肿瘤细胞,对于正常的胚胎细胞,特别是腭突发育过程中的中嵴上皮（medial edge epithelial,MEE）细胞,维甲酸作用后,是否会引起细胞生长抑制,这种抑制是否是由于维甲酸诱导的细胞凋亡所引起的却未能得到证实。Bcl-2被认为是一种原癌基因,能抑制细胞的凋亡。有学者报道,在肿瘤组织中,维甲酸可使Bcl-2磷酸化,并使其表达水平下降,Bcl-2磷酸化后导致其功能受抑,从而发挥诱导细胞凋亡的作用。但是在胚胎发育过程中,尤其是腭突的发育过程中Bcl-2对于发育的调节作用及其与维甲酸的作用关系目前还知之甚少。因此在本次实验中,建立由维甲酸诱导的C57BL/6J小鼠腭裂动物模型,并在此基础上用免疫组化的方法检测凋亡抑制因子Bcl-2在中嵴上皮细胞中的表达情况,以探讨维甲酸对于Bcl-2表达水平的影响,并分析其可能的致畸机制。方法:选取10周龄左右C57BL/6J近交系小鼠,于第一天晚8时按雌雄比2:1合笼交配。第二天上午8时检栓,将阴栓阳性的雌鼠记为妊娠0天（gestation 0 day,GD0）,共得到孕鼠36只,将这些孕鼠随机分为两组:第一组为对照组,共12只;第二组为实验组,共24只。在妊娠第10天下午1时,实验组孕鼠按100mg/kg体重灌胃维甲酸,对照组灌胃植物油0.2ml。从实验组中取12只孕鼠于妊娠16天处死,肉眼及解剖显微镜下观察胎鼠的腭裂畸形情况,以确定维甲酸的致畸率;另12只分别于妊娠13天、13.5天、14天、14.5天、15天、16天6个时间点处死,用于组织学观察及免疫组化研究。对照组中取6只孕鼠于妊娠16天处死,肉眼及解剖显微镜下观察胎鼠的腭部发育情况;另6只分别于妊娠13天、13.5天、14天、14.5天、15天、16天6个时间点处死,用于组织学观察及免疫组化研究。在腭突的水平生长阶段,用免疫组化染色检测凋亡抑制因子Bcl-2在实验组和对照组的中嵴上皮细胞中的表达差异,以得出维甲酸对于Bcl-2表达影响的结果,并由此推断出维甲酸的可能致畸原因。结果: 1. 实验组孕鼠12只,共产活胎鼠77只,死亡胎鼠2只,胚胎吸收5只,其中腭裂胎鼠47只,腭裂发生率为59.5%;对照组孕鼠6只,共产活胎鼠38只,无胎鼠死亡,胚胎吸收3只,无腭裂发生。2. 在腭突的水平生长阶段,实验组中嵴上皮细胞中Bcl-2的表达水平较对照组弱。结论: 1. 维甲酸可以诱导C57BL/6J系小鼠形成腭裂,且100mg/kg是安全而有效的致畸剂量。2. 在腭突的水平生长阶段,维甲酸能够下调Bcl-2在中嵴上皮细胞中的表达水平,从而过早的诱导了中嵴上皮细胞的凋亡,最终导致腭裂的发生。

论文目录

• 一、论文
• （一） 中文摘要
• （二） 英文摘要
• （三） 前言
• （四） 材料与方法
• （五） 结果
• （六） 讨论
• （七） 结论
• （八） 参考文献
• 二、文献综述
• （一） 正文
• （二） 参考文献
• 三、致谢