论文摘要
最近的研究结果表明,各类型的白血病均高表达血管内皮细胞生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）,进展期及晚期白血病病人VEGF表达更高。抑制白血病细胞生成和释放VEGF有可能抑制肿瘤的生长和转移,改善患者的预后。survivin是迄今发现最强的凋亡抑制因子。在ALL、AML、CML加速期和急变期的原代白血病细胞中也检测到survivin蛋白的过表达。二烯丙基二硫（diallyl disulfide,DADS）是大蒜中的一种脂溶性的有效成分,对白血病细胞有抑制作用。本实验将探讨二烯丙基二硫对人白血病HL-60细胞的作用过程中VEGFmRNA的表达及VEGF蛋白分泌的改变,研究二烯丙基二硫抑制人白血病HL-60细胞生长的机制;同时探讨是否伴随着survivin蛋白表达的变化,为DADS抗肿瘤临床应用提供实验依据。第一部分二烯丙基二硫对人白血病HL-60细胞VEGF表达及分泌的影响目的:探讨二烯丙基二硫（DADS）对人白血病HL-60细胞的生长抑制作用和HL-60细胞血管内皮细胞生长因子（VEGF）mRNA的表达及VEGF蛋白分泌的变化。方法:采用MTT法观察DADS对体外培养的HL-60细胞的生长抑制;应用ELISA法检测药物作用前后HL-60细胞培养上清液中VEGF蛋白的含量;半定量RT-PCR法检测药物作用前后HL-60细胞VEGF mRNA。结果:DADS对HL-60细胞具有明显的生长抑制效应,其对HL-60细胞的生长抑制率与药物浓度有明显依赖关系（r＞0.9,P＜0.01）,各实验组随时间增加抑制率明显增加（r＞0.7,P＜0.01）;DADS三个浓度组（0.625,1.25,2.5μg/mL）作用HL-60细胞48h和72h与空白对照相比均能下调HL-60细胞VEGFmRNA的表达及VEGF蛋白的分泌（P＜0.01）,DADS三个浓度组组间差异具有显著性（P＜0.01）,其下调HL-60细胞VEGFmRNA的表达及VEGF蛋白的分泌效果与浓度相关（r＞0.9,P＜0.01）。结论:DADS能明显抑制人白血病HL-60细胞的增殖;DADS可能通过抑制人白血病HL-60细胞VEGF mRNA的表达及VEGF蛋白分泌发挥抗白血病的效应。第二部分二烯丙基二硫对人白血病HL-60细胞增殖的影响及其机制探讨目的:探讨二烯丙基二硫（DADS）对人白血病HL-60细胞增殖的影响及survivin蛋白表达的变化和细胞周期的改变之间的关系,从而探讨DADS的抗白血病机制。方法:采用MTT法观察DADS对体外培养的HL-60细胞增殖的影响;应用SP-免疫细胞化学法检测DADS作用前后HL-60细胞内survivin蛋白的含量;同时用流式细胞仪（FCM）检测细胞周期变化。结果:DADS对HL-60细胞具有明显的生长抑制效应。其对HL-60细胞的生长抑制率与药物浓度、时间有明显依赖关系（r＞0.9,P＜0.01）。0.625μg/mL DADS干预HL-60细胞24小时,细胞生长抑制率为8.94%,随着浓度增加,时间延长,20.0μg/mL的DADS作用HL-60细胞72小时后,细胞抑制率升高至70.66%。SP免疫组化显示空白对照组及DMSO溶媒对照组均有survivin蛋白的高表达,其染色强度指数（SII）分别为1125及1126,两者无显著性差异（P＞0.05）。5、10、20μg/mL的DADS作用于HL-60细胞24、48及72小时能呈时间、浓度依赖性下调survivin蛋白的表达（r＞0.9,P＜0.01）,20μg/mL的DADS作用于HL-60细胞72小时,SII为119,survivin蛋白表达抑制最为明显。DADS三个浓度组间survivin蛋白表达均有显著性差异（P＜0.01）,与空白对照组比较也均有显著性差异（P＜0.01）。流式细胞仪检测结果提示,伴随着survivin蛋白的下调,DADS可呈浓度、时间依赖性阻滞细胞于G2/M期（r＞0.9,P＜0.01）。20μg/mL的DADS作用于HL-60细胞72小时G2/M期细胞比例达最高峰,为66.56%。结论:DADS能明显抑制人白血病HL-60细胞的增殖;DADS下调survivin蛋白,并使人白血病HL-60细胞阻滞于G2/M期。综上所述,DADS能明显抑制人白血病HL-60细胞的增殖;DADS可能通过抑制人白血病HL-60细胞VEGF mRNA的表达及VEGF蛋白分泌发挥抗白血病的效应。DADS同时下调survivin蛋白,并使人白血病HL-60细胞阻滞于G2/M期而发挥抗白血病作用。
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标签：二烯丙基二硫论文; 细胞论文; 白血病论文; 血管内皮细胞生长因子论文; 细胞周期论文;