论文摘要
终末期肝病患者需要生物人工肝(bioartificial liver BAL)来维持生命。而生物人工肝主要包括肝细胞、生物反应器和体外血浆灌注三部分。其中,肝细胞是HBAL的主要生物成分,在HBAL中起核心作用,HBAL的支持作用主要来源于肝细胞的生物代谢功能。目前肝细胞来源有异种动物的肝细胞、肝干细胞、转基因肝细胞、永生化肝细胞株、人肝细胞。其中动物来源细胞可能有病毒感染的危险;肝干细胞还处于研究起步阶段,目前用于BAL的条件尚未成熟;转基因肝细胞制备技术要求高,寻找合适的基因的问题还未解决。而人肝细胞安全性好,细胞生物学功能相同,特别是能够提供同源的生物活性物质,如白蛋白、肝细胞再生因子、凝血因子等,这些是其他细胞材料不具备的,故是目前生物人工肝的理想细胞材料。人肝细胞系有易获得、形态一致、功能稳定等优点,且分泌的白蛋白等物质与人体内的物质结构一致,也是生物人工肝生物材料的潜在来源。 制备一个具有相似功能的生物人工肝需要约200g肝细胞。临床使用的生物反应器内,细胞数量至少应该达到15%的人肝细胞数量,即约10~9个数量级才有临床意义。解决大量肝细胞需求问题传统上采取传代培养及用特殊材料为载体进行高密度培养方法,但其工作量大、易污染、费用高、对环境要求高,而且肝细胞经多次传代后,其活性、功能降低。肝细胞冻存可以克服以上肝细胞培养中的各种缺点,是解决大量肝细胞来源的重要方法。对冻存而言,国内外多采用分阶段降温,快速复温的方法;但对冻存保护剂(cryoprotectire agent CPA)的浓度、冻存液的组成及保存时间等报道不一。冻存保护剂是肝细胞冻
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