论文摘要
目的本研究拟根据人肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor，TNF）基因序列设计小发卡RNA（short hairpin RNA，shRNA），构建高效真核表达载体，通过转染人滑膜细胞观察其表达，探讨通过RNA干扰fRNA interference，RNAi)抑制TNF基因表达治疗类风湿关节炎（rheumatoid arthritis，RA）的可行性。方法根据GeneBank中人TNF mRNA全长开放读框（NM000594），设计扩增人TNF完整开放读框序列的PCR引物、探针及干扰序列。以复合阳离子脂质体介导，重组真核表达载体转染人滑膜细胞。收集转染后12h、24h、48h、72h和第7d细胞培养上清液，实时荧光定量聚合酶链反应检测培养上清液中TNF表达量，分析重组真核载体的转染表达情况。应用SPSS 11.0统计软件包进行统计学处理，P＜0.05作为差别有显著性标准。结果人肿瘤坏死因子真核表达载体pGenesil-1／TNF2转染人滑膜细胞。转染后12h、48h、72h、5d和7d的培养上清液内检测出TNF表达量较其它各组明显降低，F=21.878，P＜0.001具有显著差异。结论本研究构建并选择了表达TNF基因shRNA的真核表达载体pGenesil-1／TNF，成功转染人滑膜细胞抑制TNF表达，为今后开展RNA干扰TNF基因治疗类风湿性关节炎奠定了物质基础，提供了实验和理论依据。
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标签：干扰论文; 肿瘤坏死因子论文; 表达载体论文; 类风湿关节炎论文; 实时荧光定量聚合酶链反应论文;