论文摘要
目的:（1）检测neuritin在人类部分细胞株中的表达情况,筛选neuritin高表达和低表达细胞株;（2）探讨neuritin过表达对细胞增殖、迁移的影响。方法:（1）分别采用RT-PCR与免疫组织化学技术在mRNA水平及蛋白水平,检测本实验室现存11种人类正常和肿瘤细胞株中neuritin的表达情况;（2）扩增neuritin ORF,克隆至真核表达载体pcDNA3.1myc/his（-）A中,经转化、筛选、测序鉴定后,抽提并获取高纯度的重组质粒pcDNA3.1（-）A-neuritin,采用脂质体介导转染法将其转染neuritin低表达细胞株,RT-PCR及western-blot鉴定转染效果后,经G418筛选获得稳定表达neuritin的细胞;（3）通过MTT比色和细胞计数分析neuritin过表达对细胞增殖的影响,通过观察细胞形态变化和细胞迁移实验探讨neuritin过表达对细胞迁移的影响。结果:（1）通过RT-PCR和免疫组织化学检测,筛选出neuritin高表达细胞株293T、hUVEC、hUASMC、Soas-2、LOVO、L-02及低表达细胞株BMSCs、Hela、ECV-304、SK、QGY;（2）构建了neuritin的真核表达重组质粒pcDNA3.1（-）A-neuritin,经BamHⅠ+EcoRⅠ双酶切鉴定和测序鉴定证实neuritin基因已正确插入多克隆位点;（3）pcDNA3.1（-）A-neutitin转染人骨髓间充质干细胞（BMSCs）后,经G418筛选获得稳定表达neuritin的BMSCs;（4）镜下观察:neuritin过表达使BMSCs形态变得不规则,多伪足,且部分细胞伪足似丝状,更为细长;（5）MTT和细胞计数显示:neuritin过表达与BMSCs的数目呈负相关;（6）细胞迁移实验显示:neuritin过表达对BMSCs的迁移有促进作用。结论:（1）筛选出neuritin高表达及低表达细胞株,发现neuritin不仅在多种正常细胞中有表达,而且在部分肿瘤细胞中也有表达;（2）构建了pcDNA3.1（-）A-neutitin真核表达系统,并获得稳定表达neuritin的人骨髓间充质干细胞;（3）neuritin过表达与BMSCs的数目呈负相关,可能与细胞增殖无关;（4）neuritin过表达使BMSCs出现伪足的自主性生长,并能促进细胞的迁移;（5）neuritin过表达使部分BMSCs的形态出现类神经元样改变,可能与细胞的分化相关。
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