N-乙酰基转移酶1表型与基因多态性的关系及底物调控研究

论文摘要

背景:N-乙酰基转移酶1（NAT1）是广泛分布于人体内呈多态性表达的酶类。其基因型和表型在人群中分布情况均存在变化。某些药物（对氨基苯甲酸,5-氨基水杨酸）体内经NAT1同工酶代谢,目前认为可以应用这些底物评估不同个体NAT1乙酰化代谢多态性对临床药物治疗疾病的影响。目的:探讨汉族人群中NAT1基因多态性的分布特点,以及基因型和表型之间的相关分析。同时研究对氨基苯甲酸（PABA）对部分表型NAT1活性及NAT1 mRNA的影响。方法:收集140例汉族健康人的外周血,应用PCR（聚合酶链反应）、RFLP（限制性片段长度多态性分析）及多重PCR技术,进行NAT1等位基因分型研究。同时选择PABA作为特异底物检测外周血白细胞中NAT1的活性,代谢产物测定采用高效液相色谱（HPLC）方法。通过提取部分NAT1表型外周血中的淋巴细胞进行培养,观察不同浓度PABA（2、6、18uM）在不同时间（24h、48h、72h）对NAT1活性及NAT1 mRNA水平的影响,NAT1 mRNA分析采用RT-PCR方法。结果:联合应用PCR-RFLP及多重PCR方法可避免多种限制性内切酶之间的相互干扰,可准确区分不同NAT1基因型。在140例检测标本中,NAT1*3,NAT1*4,NAT1*10和NAT1*11的发生频率分别是8.2%,49.6%,40%和2.2%。NAT1*4的发生率明显低于欧美人群,但高于东南亚和非洲人群;而NAT1*10的发生率高于欧美人群,NAT1*3和NAT1*11的发生率较低,与大多数亚洲人群基本一致。从140例检测标本中选择32份不同NAT1基因型进行活性检测,通过计算NAT1内部清除率（Clint）、酶催化反应最大速率(Vmax)和米氏常数（Km）作为评估依据。结果发现,与野生型NAT1*4/*4相比,NAT1*4/*10、NAT1*10/*10以及NAT1*10/*3酶活性属于快代谢表型（p<0.05）;NAT1*11/*11和NAT1*4/*11酶活性要明显低于NAT1*4/*10、NAT1*10/*10和NAT1*10/*3（p<0.05）,而与NAT1*4/*3、

论文目录

• 英文缩略词表
• 中文摘要
• 英文摘要
• 1 前言
• 2 材料与方法
• 2.1 实验材料
• 2.1.1 实验对象
• 2.1.2 实验试剂
• 2.1.3 材料与设备
• 2.2 实验方法
• 2.1.1 NAT1基因型检测
• 2.2.1.1 NAT1 DNA扩增方法
• 2.1.1.2 NAT1的RFLP分析方法
• 2.1.1.3 区分NAT1*10和NAT1*3基因型的多重PCR方法
• 2.2.2 NAT1表型检测
• 2.2.2.1 NAT1表型检测体系
• 2.2.2.2 检测体系中相关代谢产物的HPLC方法
• 2.2.2.3不同基因型表型NATI代谢动力学常数的分析
• 2.2.3培养细胞中底物依赖性NATI表型调控的分析
• 2.2.3.1分离和培养淋巴细胞
• 2.2.3.2淋巴细胞中NATI活性检测
• 2.2.3.3淋巴细胞中NATI mRNA的RT一PCR分析
• 2.2.4统计学分析
• 3结果
• 3.1 NATI基因型检测结果
• 3.1.1 PcR扩增结果
• 3.1.2 NATI基因型的鉴别
• 3.1.3特异性和敏感性分析
• 4.1.4 NATI基因型分布状况
• 3.1.5汉族人群NATI基因型分布的特点
• 3.2 NATI表型检测结果
• 3.2.1检测PABA及NAePABA的HPLC方法评价
• 3.2.1.1方法专属性
• 3.2.1.2检测方法的线性范围及最低检测限
• 3.2.1.3回收率和精密度
• 3.2.2不同基因型NATI酶代谢动力学特征
• 3.2.3不同基因型NATI的表型判定
• 3.3 pABA对培养细胞中NATI活性及mRNA水平的影响
• 3.3.1 PABA对人淋巴细胞生长的影响
• 3.3.2 PABA对淋巴细胞中NATI活性的影响
• 4.3.3 PABA对NATI mRNA的影响
• 4讨论
• 4.1中国汉族人群中基因多态性特点分析
• 4.2 NATI表型检测方法的建立及评价
• 4.3 NATI表型判定及其和基因型之间相关性分析
• 4.4 pABA对NATI基因表达的影响
• 5结论
• 6存在的问题及其今后研究的设想
• 参考文献
• 附录
• 致谢
• 综述　溃疡性结肠炎药物治疗与遗传基因多态性的天系
• 综述参考文献