论文摘要
研究背景恶性肿瘤起病隐匿，微小癌灶的浸润和转移难以及时探查和治疗，是患者生存率低的主要原因。为此，阐明肿瘤浸润及转移的机制，确立可靠的预后指标和治疗靶点极为重要。研究发现，随着肿瘤进展和转移的发生，肿瘤细胞内抑癌蛋白的表达量减少，逐渐失去对肿瘤细胞生长、转移的抑制，表现为肿瘤的浸润与转移。而抑癌基因的失活是编码蛋白量减少的重要机制之一。为揭示抑癌基因失活的机理，国内外针对P53、P16等抑癌基因作了大量研究，结果表明基因的遗传不稳定性改变，即微卫星不稳定性（microsatellite instablility，MSI）和杂合性缺失（loss of heterozygosity，LOH），可能是产生基因突变，导致抑癌基因功能失调，引起肿瘤发生的重要因素。微卫星是由2～6个核苷酸组成，具有高度多态性的简单串联核苷酸重复序列。MSI是指由于复制错误导致微卫星的增多或减少。LOH是指一个位点上两个多态性的等位基因中的一个出现缺失或变异。大量研究表明，抑癌基因MSI与LOH在肿瘤的多步骤发生过程中起着重要的作用。MSI首先是在遗传性非息肉性结直肠癌（heredity non-polyposis colorectal cancer，HNPCC）中发现的，后在各种散发性肿瘤如大肠癌、胃癌、子宫内膜癌、乳腺癌、前列腺癌和胰腺癌中均发现MSI。研究表明MSI的发生提高了随机突变率，更重要的是导致了肿瘤相关基因的突变，可能是引起肿瘤发生的一个重要机制。若DNA复制错误的结果是等位基因片段的缺失，则导致LOH的发生。研究发现与抑癌基因相关的杂合性微卫星位点常伴有等位基因的丢失，即LOH的发生。所以分析LOH已成为目前检测抑癌基因失活、发现和定位新的肿瘤抑制基因的重要手段之一。KAI1（Kang AI 1）基因是近年发现的一个新的肿瘤转移抑制基因，Dong等首先从前列腺癌细胞系中分离鉴定，能抑制鼠前列腺癌细胞肺转移但不影响其致瘤能力。有研究证明，在多种癌组织和细胞系中检测到KAI1在分子水平上的表达，然而它在胃癌中的表达情况，国内外报道较少，且结论尚有争议。胃癌KAI1基因的遗传不稳定性研究尚鲜见报道。SFRP1（Secreted Frizzled Related Protein 1）基因定位于8p11.2，其编码一种分泌型糖蛋白，它可能与受体竞争结合Wnt蛋白，或直接与Wnt蛋白结合，由此阻断了Wnt信号传导通路。目前发现，有十几种已知的高发性癌变（如乳腺癌、前列腺癌、结肠癌和肝癌等等）都出现Wnt信号传导途径的失调，越来越多的学者偏向于认为SFRP1基因的遗传学改变和SFRP1蛋白的表达失活，导致Wnt通路异常活化而引发肿瘤，而国内外研究尚未结合肿瘤临床病例资料分析其SFRP1基因遗传不稳定性及SFRP1蛋白表达下调的临床学意义。研究目的研究KAI1基因D11S1344、D11S1326位点和SFRP1基因D8S505、D8S1722、D8S1180位点微卫星不稳定（microsatellite instablility，MSI）和杂合性缺失（loss of heterozygosity，LOH），对肿瘤KAI1蛋白、SFRP1蛋白表达的影响，阐明KAI1基因、SFRP1基因遗传不稳定性与肿瘤进展的关系，为揭示抑癌基因作用机制和肿瘤转移机制提供实验依据。研究方法（1）苯酚-氯仿抽提法，提取石蜡包埋的胃癌组织基因组DNA。（2）PCR-单链构象多态性（SSCP）、常规银染检测位点的遗传不稳定性。（3）Envision免疫组织化学检测蛋白表达。（4）Leica-Qwin计算机图像分析蛋白表达。（5）SPSS软件统计分析相关性。研究结果（1）胃癌KAI1基因遗传不稳定性及肿瘤临床病理特性的相关性研究：①胃癌KAI1蛋白阳性检出率为55.4％。②随着癌组织浸润程度的进展，其阳性率呈降低趋势（P＜0.01）；KAI1蛋白表达率在无淋巴结转移组（83.9％）显著高于淋巴结转移组（20.0％，P＜0.01）；在TNMⅠ+Ⅱ期（82.8％）明显高于TNMⅢ+Ⅳ期（25.9％，P＜0.01）。③56例胃癌D11S1326，D11S1344位点的SSCP分析中，均未出现MSI或LOH。（2）70例胃癌D8S505、D8S1722和D8S1180位点的SSCP分析中，均未出现MSI或LOH。结论在胃癌的发生发展中，KAI1基因D11S1326，D11S1344位点未见遗传不稳定性改变。KAI1蛋白表达与胃癌组织浸润、淋巴结转移及恶性进展密切相关。KAI1蛋白表达水平可能成为评估肿瘤细胞转移潜能的一个重要指标。在胃癌的发生发展中，SFRP1基因D8S505、DSS1722和D8S1180位点未见遗传不稳定性改变。SFRP1基因的遗传不稳定性可能不是影响胃癌发生与恶性进展的主要因素。在不同肿瘤中，SFRP1基因遗传不稳定性的抑癌机制可能也具有差异。
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