论文摘要
第一部分VEGF-C及其受体VEGFR-3／FLT-4在人宫颈癌细胞系中表达及作用目的：研究表明血管内皮生长因子-C（VEGF-C）和它的受体血管内皮生长因子受体-3（VEGFR-3／FLT-4）在肿瘤的生长和转移过程中扮演重要角色。本研究的目的是检测二者是否在人宫颈癌细胞系中表达及它们的生物学功能。其次，检测环氧合酶-2（COX-2）在人宫颈癌细胞系中表达情况并探讨它与VEGF-C表达之间的关系。方法：用流式细胞术、Western blot和RT-PCR的方法检测VEGF-C和VEGFR-3在Hela、Siha、C33a和Caski 4株宫颈癌细胞中的表达，并探讨其功能。用细胞免疫化学染色检测COX-2在宫颈癌细胞中的表达和探讨其与VEGF-C表达之间的相关性。此外，用特定浓度的重组人VEGF-c（rhVEGF-C）和COX-2特异性抑制剂NS398处理Hela细胞，评估它们是否对人宫颈癌细胞的增殖和转移有影响。结果：VEGF-C和VEGFR-3蛋白及mRNA在4株宫颈癌细胞中均有表达，但不同的细胞表达情况各不相同，VEGF-C表达水平通常都很低（＜30％）；而VEGFR-3表达水平通常都很高（≥90％）。COX-2表达于宫颈癌细胞的胞浆，且在不同细胞株中表达强弱与VEGF-C表达一致。当分别用rhVEGF-C或NS398处理Hela细胞后，其VEGF-C蛋白和mRNA表达明显增加或降低（P＜0.05），而VEGFR-3表达未发生明显改变。rhVEGF-C和NS398可诱导hela细胞增殖活性增加或降低（P＜0.05），且呈剂量依赖模式，二者对Hela细胞作用的最佳浓度分别是375ng／mL和60μg／mL。Transwell实验结果显示rhVEGF-C处理组细胞侵袭力（55.76±2.16）较对照组（40.38±0.72）明显增强（P＜0.01），而NS398处理组（25.45±3.67）及单克隆抗人VEGFR-2抗体+VEGFR-3阻断肽处理组细胞侵袭力（27.15±3.99）均较对照组减弱（P＜0.05）。结论：VEGF-C、VEGFR-3和COX-2均在人宫颈癌细胞中表达，且COX-2与VEGF-C表达之间有一定的相关性。VEGF-C及其受体系统可能在调节肿瘤生长和转移中扮演重要角色。COX-2可能是宫颈癌细胞中VEGF-C表达的一个调节者，其抑制剂NS398对于VEGF-C介导的肿瘤生长和转移有一定的治疗作用。第二部分VEGF-C、VEGFR-3和COX-2在早期宫颈癌组织中的表达及意义目的：众所周知，淋巴管浸润和淋巴结转移在宫颈癌的发展进程中起着十分关键的作用。最近对各种不同肿瘤研究显示VEGF-C，一个特异性的淋巴管生长因子，与肿瘤诱导的淋巴管生成及肿瘤细胞淋巴管转移播撒有关。本研究的目的是检测VEGF-C及其受体VEGFR-3／flt-4在宫颈病变组织中的表达，探讨二者在宫颈癌发生发展、淋巴管生成及淋巴结转移中的作用。本研究的另一目的是检测COX-2在宫颈癌组织中的表达，探讨其与VEGF-C和VEGFR-3之间的关系。方法：收集本院1998年1月～2003年12月手术切除的宫颈病变组织标本78例，应用VEGF-C、VEGFR-3／flt-4和COX-2多克隆抗体进行SP法免疫组化染色。临床资料从病例记录中获得。结果：78例宫颈病变组织中，VEGF-C表达范围为0～71％，其中阴性（-）16例（20.5％），弱阳性（+）21例（26.9％），中等阳性（++）26例（33.4％），强阳性（+++）15例（19.2％）。14例伴淋巴结转移者VEGF-C表达为++～+++。随着病变由慢性宫颈炎到非典型增生再到宫颈原位癌和浸润癌的进展VEGF-C表达逐级增强。VEGF-C与VEGFR-3／flt-4之间及二者表达与淋巴管生成及淋巴结转移之间均呈明显的正相关。46例宫颈癌组织COX-2阳性率为30.4％。在COX-2表达阳性部位，VEGF-C大多数呈强阳性反应，且二者均在癌巢中强表达。统计分析揭示VEGF-C和COX-2表达之间有密切的相关性，且共同表达VEGF-C和COX-2与肿瘤周围间质淋巴管密度相关。结论：VEGF-C可能在宫颈癌癌变过程中起一定的促进作用，VEGF-C／VEGFR-3调控系统与宫颈癌组织的淋巴管生成及肿瘤细胞的淋巴结转移密切相关。COX-2可能参与了VEGF-C介导的淋巴管生成途径，二者的高表达可能在宫颈癌淋巴管增殖及癌细胞转移播散中起重要的作用。第三部分VEGF-C与鼻咽癌增殖和转移关系的研究目的检测血管内皮生长因子C（VEGF-C）在鼻咽癌（NPC）组织中的表达，探讨其与鼻咽癌细胞增殖和转移的关系。方法鼻咽癌患者放疗前活检组织标本62例，将每例标本均分2份，一份应用VEGF-C多克隆抗体进行SP法免疫组化染色，另一份应用流式细胞术以Ki67抗体检测其增殖状况。放疗后定期随访患者，统计分析其3年生存率及死亡原因。结果62例NPC标本中，VEGF-C表达范围为0～82％，其中阴性（-）17例（27.4％），弱阳性（+）13例（21.0％），中等阳性（++）18例（29.0％），强阳性（+++）14例（22.6％）。Ki67表达范围为0～52％，其中低表达（LPI）者40例（64.5％，含15例阴性），高表达（HPI）者22例（35.5％）。VEGF-C与Ki67表达之间存在明显的正相关（r=0.323，P＜0.05）。3年生存率为66.1％。有淋巴结转移者的VEGF-C表达显著强于无淋巴结转移者（P＜0.01）。8例死于远处转移者中，VEGF-C表达均为强阳性；21例无病生存者中，VEGF-C表达为（-）或（+）者占80.9％。VEGF-C表达与患者预后存在一定的负相关，但差异无统计学意义（r=-0.219，P＞0.05）。结论VEGF-C高表达与鼻咽癌细胞的增殖和转移能力相关，但其不是影响患者预后的独立因素，而是一个预测无病生存期长短的指标。
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