论文摘要
目的:观察不同保存方法及保存时间对羊膜组织形态及生物学活性的影响,筛选能较好地保存羊膜的组织形态及活性的方法,为临床应用提供依据。 方法:取健康剖宫产产妇胎盘羊膜,随机分成四组保存:DMEM/甘油深低温组、纯甘油 4℃组、无水酒精组、真空干燥组。于保存后 1、3 个月、12 个月(DMEM/甘油组和纯甘油组),行 HE 染色光镜、透射电镜检查,免疫组织化学方法检测 HGF、bFGF、ColⅣ和 LN 的表达,ELISA 检测 HGF、bFGF 的含量,并以新鲜羊膜作对照。 结果: 1 光镜下,DMEM/甘油保存 1、3 个月羊膜组织结构基本完整,保存 12 个月上皮细胞轻度破坏;纯甘油保存 1、3、12 个月羊膜上皮细胞结构破坏,保存 12 个月基质层结构轻度破坏;无水酒精保存 1、3个月羊膜组织结构较完整;真空干燥保存 1、3 个月羊膜上皮细胞和部分基质层结构破坏明显。 2 电镜下,DMEM/甘油保存 1、3、12 个月羊膜上皮细胞完整,胞核局部溶解,线粒体肿胀,基底膜正常;纯甘油保存 1、3、12 个月重庆医科大学硕士研究生学位论文 3上皮细胞破坏更明显,基底膜疏松;无水酒精保存 1、3 个月上皮细胞胞膜破坏,胞质、胞核溶解,基底膜变薄;真空干燥保存 1、3 个月上皮细胞完整,核均质化与溶解并存,基底膜变薄。3 HGF、bFGF 主要分布于羊膜上皮层。HGF 在各组保存 1、3 个月、bFGF 在真空干燥组保存 1、3 个月和其他三组保存 3 个月时的表达明显低于新鲜羊膜组,统计学上差异有显著性(p<0.05)。HGF 在各组(除外 DMEM/甘油保存 1 个月)的含量均明显低于新鲜羊膜组,bFGF在真空干燥组和纯甘油组保存 3 个月、无水酒精组保存 1、3 个月时的含量明显低于新鲜羊膜组,统计学上差异有显著性(p<0.05)。4 ColⅣ和 LN 主要分布于羊膜基底膜。ColⅣ在 DMEM/甘油组保存 1、3 个月、纯甘油组和无水酒精组保存 1 个月时的表达与新鲜羊膜组相比差异无显著性(p>0.05),LN 在 DMEM/甘油组和纯甘油组保存1、3、12 个月、无水酒精组和真空干燥组保存 1 个月时的表达与新鲜羊膜组相比差异无显著性(p>0.05)。结论:1 四种保存方法对羊膜的组织形态及生物学活性均有不同程度的影响。2 DMEM/甘油深低温保存法能较好地保存羊膜的组织结构,纯甘油保存法次之,无水酒精和干燥保存方法保存效果差。3 羊膜经 DMEM/甘油深低温、纯甘油 4℃保存后,其上皮生长因子减少,并随保存时间的延长活性逐渐下降,但羊膜基底膜成分并无明