基于万年青临床经验的成分分析探索研究

论文摘要

万年青品种为百合科万年青Rohdea japoni ca（Thunb.） Roth.[Orontium japonicum thumb]的根,具清热解毒,强心利尿之功效,主治咽喉肿痛,白喉,痄腮,疮疡肿毒,乳痈,蛇虫咬伤,心力衰竭,水肿,膨胀,咯血,吐血。本论文探索的临床经验来源于《中医革新—病机论疗法》一书,延年丸方药中万年青治疗心衰用药经验,书中记载：万年青“汤剂30g无效”、“炒枯无效”、“散剂使心脏停止于收缩期”等。以此记载,得出研究假说：首先,于治病物质基础方面,万年青中脂溶性部分比水溶性部分治病物质量多,可能存在热敏物质、易升华／挥发的物质,分析对比炒枯样品的差异能帮助寻获其中的治病物质基础；其次,于治病机理方法,对万年青散剂强烈副作用的研究能反证临床经验的可靠性,万年青中强心作用机制可能不止一个。本论文根据研究假说,建立了不同的药理药效分析方法,并对万年青不同样品进行分析,结果如下：1、万年青成分综合预试与分析跟踪方法的建立万年青系统成分预试结果显示,万年青中包含的强心苷类、多糖类、生物碱类、有机酸类成分,而这些化学成分具有多种生理活性和应用前景,证实了万年青中除强心苷外还可能存在其它活性物质。本文建立了万年青不同部位的TLC和HPLC-UV分析方法,其中于TLC中三氯甲烷及氨性三氯甲烷样品中存在能被稀碘化铋钾显色的成分；对比各极性展开条件及各样品,水煮样品不存在低极性斑点及中等极性斑点,即临床经验中丸散剂,包含了汤剂不包含的生物碱类和极性较低的萜类物质。对HPLC所检测的峰及样品酸碱水解物进行分析,发现HPLC-UV分析方法主要针对强心苷类物质进行了分析；同时酸碱水解检测得两个明显的新峰,对这两峰进行分析,发现这两峰的紫外全波长吸收不为强心苷的特征紫外吸收,其结构及性质有待研究。2、基于成分分析的临床经验内涵探索对样品进行水、乙醇,三氯甲烷浸出试验,结果水溶性浸出物比三氯甲烷浸出物多47倍左右,则临床经验中万年青的脂溶性物质比例低于水溶性物质。将万年青生品、炒品及干馏物各提取液,以TLC分析方法分析,结果炒后根和干馏样品出现了新的斑点,证实万年青存在热敏物质。对不同炒枯的万年青样品进行HPLC-UV分析,结果万年青在不同炒枯程度的样品HPLC图谱变化明显：图谱10.8min位置的新峰与部分峰的消失,进一步说明万年青中存在热敏性物质,同时亦说明中医临床经验中强心苷亦为其有效成分。本论文建立了万年青干馏物的GC-MS鉴别方法,结果显示,GC-MS与TLC分析结果存在一定的差异,两者分析结果可以相互补充,但GC-MS中所测得物质中没有氮元素的存在,其原因有待考究。3、“3g可致人心脏停止于收缩期”探索研究心电实验显示,万年青粉剂组心电振幅与汤剂组振幅相当,但粉剂量相当于汤剂量的1／4倍,推测万年青生品中可能存在其它成分起强心作用；万年青粉剂及汤剂有相对较强的强心作用,则粉剂对心肌损伤应该与汤剂相当,但实验结果却是汤剂组死亡率较高、给药后存活时间较短。依据实验结果推测万年青生品治疗心衰的作用,可能还包括保护心肌作用。4、万年青非强心苷正性肌力作用探索建立了小鼠PDE3酶活性测定方法,研究了万年青不同用法对小鼠PDE3酶影响实验。结果发现万年青粉剂对正常小鼠的PDE3酶有一定的抑制作用,进一步证实了万年青还有其他的强心物质。本论文通过对万年青临床经验探索证实：1)万年青临床经验中的有效成分除强心苷类成分外,其汤剂中不包含的成分亦可能为临床的所述的重要成分；2)万年青药理学研究证实,万年青生品中可能存在保护心肌的成分或其存在扩张冠脉的成分,同时存在其它的强心成分。试验证实了临床经验有一定的科学性,但万年青“3克可致人心脏停止于收缩期”的经验于正常实验动物中并末体现,临床经验的科学性有待继续考究。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 引言
• 第一章 文献研究
• 1 心力衰竭现代研究进展
• 1.1 心力衰竭病理机制
• 1.2 治疗方法研究进展
• 1.3 心力衰竭发治疗存在的问题
• 2 万年青研究进展
• 2.1 万年青植物研究概述
• 2.2 万年青药材研究概述
• 2.3 万年青药理作用
• 2.4 万年青古文献应用记载
• 3 万年青治疗心力衰竭临床经验来源
• 3.1 万年青临床应用文献
• 3.2 万年青探索研究文献来源
• 4 文献研究总结与研究假说
• 第二章 品种确定与实验条件
• 1 品种确定
• 2 品种鉴定
• 3 仪器与试剂
• 4 实验动物
• 第三章 万年青成分综合预试与分析跟踪方法建立
• 1 成分综合预试
• 1.1 目的
• 1.2 供试品制备
• 1.3 结果与讨论
• 2 薄层色谱分析方法初步建立
• 2.1 目的
• 2.2 供试品制备
• 2.3 阴性样品制备
• 2.4 薄层色谱条件及结果
• 2.5 讨论与结论
• 3 高效液相色谱分析方法跟踪方法建立
• 3.1 目的
• 3.2 供试品溶液制备
• 3.3 色谱方法确定
• 3.4 方法学考察
• 3.5 HPLC—UV图谱分析
• 3.6 讨论和结论
• 第四章 基于成分分析的临床经验内涵探索
• 1 考察脂溶性部位比例
• 1.1 目的
• 1.2 方法
• 1.3 结果与讨论
• 2 样品TLC分析
• 2.1 目的
• 2.2 干馏样品TLC分析方法确定
• 2.3 临床经验样品TLC分析
• 3 样品HPLC分析
• 3.1 目的
• 3.2 HPLC炒枯样品成分分析
• 4 升华样品GC—MS鉴别
• 4.1 目的
• 4.2 供试品制备
• 4.3 MS结论与讨论
• 5 临床经验物质探索研究总结果讨论与结论
• 第五章 "3克可致人心脏停止于收缩期"的探索试验
• 1 研究依据
• 2 对万年青强烈副作用内涵探索
• 3 万年青对豚鼠心电图影响
• 4 探索讨论与结论
• 第六章 万年青非强心苷正性肌力作用的探索
• 1 研究依据
• 2 小鼠PDE3酶活性测定方法
• 2.1 色谱方法确定
• 2.2 方法学考察
• 3 万年青对小鼠PDE3酶的影响
• 3.1 实验方法
• 3.2 结果与讨论
• 4 临床经验药理学研究小结
• 第七章 讨论与展望
• 1 万年青临床经验探索结果与展望
• 2 万年青临床经验探索引发的问题与思考
• 参考文献
• 附录
• 附录1:生药学研究原图
• 附录2:预试试剂配制方法
• 研究生在学期间发表论文情况
• 致谢