AQP4、AQP9在大鼠眼组织的定位与功能研究

论文摘要

目的: 观察急性高眼压状态AQP4、9及其mRNA在大鼠眼组织的表达变化,以探讨AQP4、9与某些眼压异常性疾病的关系。 方法:成年健康雄性 Wistar 大鼠 105 只,体重 250—300g,随机分为正常组（15 只）和实验组（90 只）。实验组大鼠用 3.5%水合氯醛麻醉后,左眼行前房穿刺后加压灌注制作大鼠急性高眼压模型,右眼只穿刺不灌注作为对照;灌注压分别为 75cm、125cm 和 150cm 水柱,维持 60 分钟后停止灌注。各实验组大鼠选取加压灌注后 3h、6h、12h、24h、48h、72h 等 6 个时间点进行观察。在相应时间点处死大鼠,做灌流固定和冰冻切片,片厚 15u。HE 染色进行病理观察;用图像分析仪测量视网膜内层的厚度;应用免疫组化和原位杂交实验分别检测 AQP4、AQP9及其mRNA的表达;采用图像分析技术分析视网膜组织AQP4和AQP9及其 mRNA 的表达水平。正常组大鼠直接用 3.5%水合氯醛麻醉后做灌流固定和冰冻切片,片厚同上。 结果:停止灌注 3h 后,视网膜厚度逐渐增加,12h 达高峰,72h左右接近恢复正常。HE 染色可见角膜肿胀;视网膜水肿,细胞周围间隙增宽,细胞密度下降,12h 后达到高峰,24h 后逐渐消退,72h 左右接近恢复正常。免疫组化结果显示,AQP4 和 AQP9 在正常大鼠的睫状体非色素上皮细胞、虹膜后色素上皮细胞、角膜上皮细胞、晶状体上皮细胞、视网膜各层均有表达;实验组大鼠加压灌注后,AQP4 和 AQP9在各时间段的表达较对照组均有显著增加，在停止灌注后 24h 达高峰。原位杂交信号的分布及其高峰出现的时间与免疫组化结果一致。统计分析结果显示，在急性高眼压所致视网膜水肿的整个过程中，AQP4、AQP9 分别与其 mRNA 的表达呈显著正相关；并且与视网膜厚度的变化亦呈高度正相关。 结论：前房加压灌注后，视网膜呈水肿样改变，其厚度出现不同程度增加；同时，AQP4、AQP9 及其 mRNA 的表达增强，其表达上调的高峰时间与视网膜厚度增加的高峰时间基本一致。上述结果提示，AQP4、9 的异常高表达与急性高眼压的病理损伤过程有关；AQP4、9在眼内水运输平衡中可能同时兼有压力感受器和水通道蛋白的双重功能。重庆医科大学硕士研究生学位论文 5第二部分渗透压改变对大鼠眼组织 AQP4、AQP9 及其 mRNA 表达的影响摘 要目的: 探讨眼内渗透压变化对AQP4、9及其mRNA表达的影响,以明确AQP4、9在眼内渗透压调节过程中的作用。方法:成年健康雄性 Wistar 大鼠 108 只,体重 250—300g,随机分为低渗组和高渗组各 54 只,两组均按渗透压高低又分为三个小组（268mOsm/L, 254mOsm/L, 240mOsm/L/330mOsm/L , 338mOsm/L , 350mOsm/L）,每组取 3h、6h、12h、24h、48h 及 72h 共 6 个时间点进行观察。采用前房穿刺后灌注不同渗透梯度的 D-hanks 液制作渗透压改变大鼠模型,灌注压维持在 50cmWC 水平,持续 60 分钟后停止。各实验组大鼠的左眼作穿刺灌注;右眼只穿刺不灌注,作为对照。HE 染色进行病理观察;并用图像分析仪测量视网膜内层的厚度;IHC 检测 AQP4、AQP9 的表达;ISH 检测 AQP4mRNA 及 AQP9mRNA 的表达;实验结果采用图像分析技术分析视网膜组织 AQP4 和 AQP9 及其 mRNA 的表达水平。结果:与对照组相比,在低渗灌注停止后3h,视网膜厚度开始增加,随时间的推移和渗透压的降低,其厚度不断增加,12h达高峰,24h以后逐渐恢复,72h左右接近恢复正常;在高渗灌注停止后3h,视网膜厚度有所下降,6h后开始增加,12h达到高峰。HE染色可见,低渗灌注后3h出现角膜增厚,其上皮细胞肿胀;虹膜、睫状体血管充血、渗出,组织水肿;视网膜各层水肿明显,严重者出现视网膜剥离;在高渗灌注停止后3h,视网膜细胞轻度脱水,6h后视网膜出现水肿,12h达到高

论文目录

• 符号说明
• 前言
• 中文摘要
• 英文摘要
• 重要的实验仪器与试剂简介
• 第一部分 压力因素对大鼠眼组织AQP4、AQP9 及其mRNA 表达的影响
• 前言
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 小结
• 参考文献
• 照片（一）
• 第二部分 渗透压改变对大鼠眼组织AQP4、9 及其mRNA 表达的影响
• 前言
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 小结
• 参考文献
• 照片（二）
• 全文小结
• 文献综述
• 致谢
• 攻读硕士学位期间撰写、发表的学术论文