论文摘要
一、牛γ-干扰素和人溶菌酶共表达载体的构建及表达分别将牛γ干扰素基因（BoIFN-γ）和内部核糖体位点（IRES）从pFAST-IFN载体和pIRES载体质粒上双酶切回收,亚克隆到pFASTBac-hLyz载体中,构建转移载体pFASTBAC1-IFN-IRES-hLyz;转移载体质粒转化DH10Bac感受态大肠杆菌,通过位点特异性转座作用将牛γ干扰素基因（BoIFN-γ）和人溶菌酶基因（hLyz）整合到Bacmid穿梭载体中。在含庆大霉素、四环素、卡那霉素、IPTG和X-gal的LB平板上筛选发生转座的白色菌落,提取DNA,获得重组穿梭载体Bacmid-IFN-IRS-hLyz;将重组穿梭载体Bacmid-IFN-IRS-hLyz用脂质体介导转染Sf9昆虫细胞,产生有感染力的重组杆状病毒; PCR扩增结果证实BoIFN-γ和hLyz基因重组到杆状病毒基因组中;表达产物中含有牛γ-干扰素和人溶菌酶重组蛋白。二、牛γ-干扰素真核表达产物的纯化分别以不同MOI的重组病毒感染Sf9细胞,并在感染后不同时间段收集上清,进行表达产物的活性检测,选择最佳的优化条件进行重组蛋白的大量生产。将重组牛γ干扰素感状病毒感染Sf9细胞,5天后收获细胞上清,透析浓缩后,用羟基磷灰石层析和疏水层析过柱,获得初步纯化的牛γ干扰素重组蛋白。
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