螺虫乙酯对大鼠的生理影响及其体内分布检测方法的建立

论文摘要

农药是一把双刃剑,在为农业增产增收做出贡献的同时,也带来了一些不可抗拒的负面效应。扩散、残留、富集是化学农药不可避免的环境行为。化学农药残留物随着大气和水的运动做长距离迁移,从一种环境介质扩散到另一种环境介质,并且可通过食物链影响到远距的人和其它动物。农药不仅通过食品、水和空气威胁着人类健康,而且对鸟类、兽类和其它一些高等动物均有一定程度的间接影响,这种影响主要是通过食物链富集和从环境中吸收造成的。目前,已经进行了多类农药在两栖类、鱼类以及哺乳动物体内的毒理研究。三唑类、酰胺类、沙蚕毒素类、拟除虫菊酯（溴氟菊酯、氟氰菊酯、氯菊酯等）等已有较为透彻研究,但关于季酮酸类化合物研究较少,本文根据这一现状进行了螺虫乙酯对大鼠的生理影响及其体内残留与分布的研究。1.在螺虫乙酯分析方法研究中,对UPLC-MS/MS各项参数进行了优化,显著缩短检测时间。选择0.1%甲酸水溶液-乙腈为流动相,梯度洗脱的进样方式。流动相中加入甲酸显著提高了质子化效率,并通过调整流速和梯度洗脱等条件,实现了目标峰和干扰峰的良好分离并使峰形得到改善。每个样品的分析时间仅需5min,节省了分析时间和试剂消耗量。在质谱调谐中,采用流动注射泵连续进样,以全扫描模式确定采用多离子反应检测模式检测（MRM）确定螺虫乙酯的m/z374.0/216.0为定量离子对,m/z374.0/302.0为定性离子对。2.应用UPLC-MS/MS法建立了螺虫乙酯的残留检测方法,分别对大鼠脂肪、肌肉及脏器进行分析,采用乙腈做为提取溶剂。螺虫乙酯回收率在81.6%～103.5%之间,相对标准偏差在4.6%～8.9%之间,最低检测浓度为0.005 mg/kg,最小检出量为1.2×10-13g。3.螺虫乙酯攻击大鼠的主要部位为肝脏、肾脏等解毒、排毒器官,且各器官螺虫乙酯残留量与浓度有密切关系,当给药浓度为2倍关系时,检测残留量也呈现出近似于2倍。4.螺虫乙酯对酸性磷酸酯酶的酶活力无显著影响。离体条件下,随着螺虫乙酯浓度的增大酶活力增强,且呈线性关系（Y=0.0032X+1.0537,R2=0.9199）。活体培养条件下,螺虫乙酯50 mg/kg /d给药7 d后,酶活性为对照的1.26倍。加大给药剂量为100 mg/kg /d后,酶活力升高为1.48倍。在停止给药后7 d,酶活力分别降低至1.22倍和1.42倍。14 d时,酶活力分别降低至1.16倍和1.36倍。5.螺虫乙酯对碱性磷酸酯酶的酶活力无显著影响。螺虫乙酯对碱性磷酸酯酶的酶活力有抑制作用。离体条件下,随着螺虫乙酯浓度的增大酶活力减弱,且呈线性关系(Y=3×10-5X2-0.0044X+0.9743, R2=0.9449)。活体培养条件下,给药7 d后螺虫乙酯50 mg/kg /d处理酶活性为对照的0.94倍,加大给药剂量为100 mg/kg /d后酶活力降低0.86倍;在停止给药后7 d,酶活力分别升高至0.96倍和0.89倍;14 d时酶活力分别升高至0.97倍和0.91倍。6.螺虫乙酯对羧酸酯酶的酶活力无显著影响。离体条件下,随着螺虫乙酯浓度的增大羧酸酯酶活力减弱,且羧酸酯酶的酶活力与螺虫乙酯浓度呈线性关系（Y=-0.0013X+0.9639,R2=0.9532）。活体培养条件下,在给药7 d后螺虫乙酯50 mg/kg /d处理酶活性为对照的0.93倍,加大给药剂量为100 mg/kg /d后酶活力降低为0.87倍;在停止给药后7 d,酶活力分别升高至0.96倍和0.90倍;14 d时酶活力分别升高至0.97倍和0.96倍。7.螺虫乙酯50 mg/kg /d和100 mg/kg /d饲喂大鼠7 d后,给药组与空白对照相比,大鼠体重增加率和食物利用率均无显著差异。大鼠摄入螺虫乙酯后,可对大鼠肝脏和睾丸脏器系数均无显著差异。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 1 引言
• 1.1 残留检测技术
• 1.1.1 残留检测基本情况
• 1.1.2 残留检测国内外研究进展
• 1.1.3 残留检测前处理技术的研究
• 1.2 毒理学研究
• 1.2.1 毒理学概述
• 1.2.2 食品毒理学
• 1.2.3 生物体内的酶
• 1.2.4 国内外研究进展
• 1.3 螺虫乙酯简介
• 1.3.1 季酮酸类化合物简介
• 1.3.2 螺虫乙酯基本情况
• 1.3.3 螺虫乙酯的应用概况
• 1.4 研究内容与技术路线
• 1.4.1 研究内容
• 1.4.2 技术路线
• 1.5 本论文的研究目的与意义
• 2 材料和方法
• 2.1 螺虫乙酯残留检测
• 2.1.1 样品的制备
• 2.1.2 前处理方法
• 2.1.3 UPLC-MS-MS 仪器方法
• 2.1.4 标准曲线
• 2.1.5 计算公式
• 2.2 螺虫乙酯在大鼠体内分布
• 2.2.1 供试药剂
• 2.2.2 主要仪器设备
• 2.2.3 供试动物
• 2.2.4 试验方法
• 2.3 酶活力测定
• 2.3.1 供试动物
• 2.3.2 供试药剂
• 2.3.3 主要试验仪器
• 2.3.4 酸性磷酸酯酶（ACP） 活性的测定方法
• 2.3.5 碱性磷酸酯酶活性的测定方法
• 2.3.6 羧酸酯酶活性的测定
• 2.3.7 酶活力计算
• 2.4 蛋白含量的测定
• 3. 结果与分析
• 3.1 螺虫乙酯在大鼠体内残留检测方法的建立
• 3.1.1 提取条件的选择
• 3.1.2 净化方法的选择
• 3.1.3 仪器条件的优化
• 3.1.4 方法的灵敏度、准确度和精密度
• 3.2 螺虫乙酯在大鼠体内分布
• 3.3 大鼠对螺虫乙酯的生理反应
• 3.3.1 螺虫乙酯对大鼠体重增加率和食物利用率的影响
• 3.3.2 螺虫乙酯对大鼠脏器系数的影响
• 3.4 螺虫乙酯对大鼠体内酶活力的影响
• 3.4.1 活体条件下螺虫乙酯对大鼠体内酶的影响
• 3.4.2 离体条件下螺虫乙酯对大鼠体内酶的影响
• 4 讨论
• 4.1 螺虫乙酯对大鼠食物利用率、体重增长率和脏器系数的影响研究
• 4.2 螺虫乙酯在大鼠体内分布的研究方法
• 4.3 螺虫乙酯对大鼠体内酶活力的影响研究
• 5 结论
• 致谢
• 参考文献
• 攻读硕士学位期间发表的学术论文