天灸对Lewis肺癌化疗小鼠肿瘤转移抑制基因表达及其免疫功能的影响

论文摘要

肺癌在我国发病率很高,但肺癌患者的 5 年生存率只有 10%,约 70-80%的肺癌患者接受化疗。因抗癌药物治疗指数狭小所引起的不良反应往往限制了癌症治疗的最佳用药。因此防治化疗反应越来越受人们重视,本实验通过研究移植性Lewis肺癌小鼠经天灸治疗和顺铂化疗后机体的免疫功能和肿瘤转移抑制基因的表达了解天灸在肺癌治疗过程中的增效减毒作用。 本实验将 C57BL/6J 近交系小鼠常规饲养 3 天后,随机分成 5 组,正常组,模型组,化疗组,天灸组,天灸+化疗组。正常和模型组不治疗,其余三组采用不同的治疗方法,通过观察小鼠的饮食、体重及整体情况,研究天灸对肺癌化疗小鼠的减毒作用。 本实验采用 MTT 法检测 Lewis 肺癌化疗小鼠脾脏 NK 细胞活性,采用放射免疫分析法检测 Lewis 肺癌化疗小鼠外周血白细胞介素-2（IL-2）水平,研究天灸对小鼠免疫功能的影响。 本实验采用免疫组织化学法和定量逆转录多聚酶链反应法（RT-PCR）检测Lewis 肺癌化疗小鼠肿瘤转移抑制基因（nm23-M1）的蛋白及 mRNA 表达,探讨天灸对肺癌化疗小鼠的增效机理。 通过观察天灸膏贴敷肾俞穴前后各组小鼠指标的变化,并将治疗组与正常和模型对照组进行比较,获得以下结论: 1.正常组、模型组、天灸组三组的鼠重均大于化疗组、天灸+化疗组,化疗组鼠重最轻;正常组、模型组、天灸组三组分别与化疗组、天灸+化疗组比较均有显著差异;化疗组和天灸+化疗组比较也有统计学差异。化疗组和天灸+化疗组的饮食量从第四天开始下降,但天灸+化疗组饮食量大于化疗组。 说明使用顺铂化疗药将导致肺癌小鼠体重减轻,食欲降低,饮食量减少,而天灸可以减轻这一毒副作用。 2.从肿瘤重量、抑制率分析可以看出,三个治疗组与模型组比较,都有统计学差异;天灸+化疗组瘤块重量最小,依次是化疗组、天灸组,未经治疗的模型组瘤块最大,说明化疗组、天灸组和天灸+化疗组对移植性 Lewis 肺癌均有明显的抑制作用,而天灸+化疗组抑制率最大,达到 36.0%。从瘤组织 HE 染色观察,天灸+化疗组出现多处核固缩、碎裂和空泡。说明天灸有加强化疗对小鼠肺癌的生长抑制作用。 3.实验结果显示天灸组的 NK 细胞活性最强,与各组比较均有统计学意义。天灸组小鼠血清 IL-2 含量与正常组、模型组比较都有统计学差异,天灸+化疗组与模型组比较也有统计学差异,天灸+化疗组血清 IL-2 含量略高于化疗组。说明天灸疗法可以使小鼠血清 IL-2 含量升高,脾脏 NK 细胞活性增强,天灸对肺癌化疗小鼠免疫功能有调节作用。 4.治疗后检测各组 Lewis 肺癌小鼠的 nm23-M1基因的蛋白和 mRNA 表达,统计学分析得出,天灸+化疗组 nm23-M1基因的蛋白表达最多,与模型组比较差异显著;说明天灸+化疗对肺癌小鼠 nm23-M1基因蛋白表达有促进作用;天灸和天灸+化疗的治疗方法能明显促进 Lewis 肺癌小鼠 nm23-M1基因的 mRNA 表达;从基因的角度证明天灸对顺铂化疗的增效作用。但从肺脏表面的肿瘤转移结节肉眼计数分析,各组比较均没有统计学意义。

论文目录

• 目录
• 中文摘要
• 英文摘要
• 英文缩略词表
• 文献与理论研究
• 综述一 天灸文献研究
• 1 古代“天灸”的含义
• 2 天灸疗法的源流
• 3 古代天灸药物的制作和治疗方法
• 4 现代应用及研究
• 5 总结展望
• 6 参考文献
• 综述二 肺癌化疗增效减毒的研究进展
• 1 减轻骨髓抑制
• 2 抗感染
• 3 防治消化道反应
• 4 对免疫功能的调节
• 5 保护肝肾
• 6 抑制肿瘤转移
• 7 减少癌痛
• 8 参考文献
• 实验研究
• 前言
• 实验流程图
• 实验一天灸对Lewis 肺癌化疗小鼠的减毒作用
• 材料与方法
• 1 材料
• 1.1 实验动物
• 1.2 实验药物
• 1.3 主要仪器
• 2 方法
• 2.1 动物饲养
• 2.2 动物分组
• 2.3 Lewis 肺癌模型的建立
• 2.4 治疗方法
• 2.5 指标检测方法
• 2.6 统计分析
• 实验结果
• 1 对体重变化的影响
• 2 对小鼠饮食情况观察结果
• 讨论
• 参考文献
• 实验二 天灸对 Lewis 肺癌化疗小鼠脾 NK 细胞活性及血清 IL-2 水平的研究
• 材料与方法
• 1 材料
• 1.1 实验动物
• 1.2 实验药物
• 1.3 主要试剂
• 1.4 主要仪器
• 2 方法
• 2.1 动物饲养
• 2.2 动物分组
• 2.3 Lewis 肺癌模型的建立
• 2.4 治疗方法
• 2.5 测小鼠脾脏NK 细胞活性，用MTT 法
• 2.6 检测小鼠血清IL-2 水平，用放射免疫分析法
• 2.7 统计分析
• 实验结果
• 1 对小鼠脾脏NK 细胞活性的影响
• 2 对小鼠血清IL-2 水平的影响
• 讨论
• 参考文献
• 实验三 天灸对 Lewis 肺癌化疗小鼠的癌细胞生长、转移及nm23-M1 基因表达的研究
• 材料与方法
• 1 材料
• 1.1 实验动物
• 1.2 实验药物
• 1.3 主要试剂
• 1.4 主要仪器
• 2 方法
• 2.1 动物饲养
• 2.2 动物分组
• 2.3 Lewis 肺癌模型的建立
• 2.4 治疗方法
• 2.5 取材
• 2.6 计算肺表面转移结节数
• 2.7 计算肿瘤抑制率
• 2.8 肿瘤组织形态学观察，HE 染色，光镜观察
• 2.9 测肿瘤转移抑制基因（nm23-M1）的蛋白表达，用免疫组织化学法
• 2.10 nm23-M1基因的mRNA 表达，采用实时荧光定量RT-PCR 方法
• 2.11 统计分析
• 实验结果
• 1 肺脏癌转移结节情况
• 2 对肿瘤的抑制作用
• 3 肿瘤组织形态学观察
• 4 小鼠肿瘤nm23-M1 基因的蛋白表达结果
• 5 总RNA 和PCR 扩增产物电泳图
• 6 正常组小鼠的肺组织和其余4 组的瘤组织中nm23-M1基因的mRNA 表达
• 讨论
• 参考文献
• 结论
• 致谢
• 个人简历
• 附图