论文题目: 松毛虫T4病毒的分离及其分子生物学特性的研究
论文类型: 博士论文
论文专业: 微生物学
作者: 易福明
导师: 胡远扬
关键词: 松毛虫,病毒,血清学,基因组结构,鉴定
文献来源: 武汉大学
发表年度: 2005
论文摘要: 我们在松毛虫病毒的资源调查中从罹病的马尾松毛虫发现了一种球形二十面体病毒粒子,它不同于已经报道的松毛虫病毒中的任何一种。通过对这种新的病毒的理化性质、血清学以及基因组核苷酸全序列分析,我们确定该病毒是T4病毒科松天蛾ω类似病毒属的一个新成员,且暂时将其命名为松毛虫T4病毒(Dendvolimus puncfatus tetravirus,DpTV)。 通过匀浆、差异离心、蔗糖密度梯度离心、氯化铯等密度离心等方法,我们最终分离获得了高浓度的病毒离子,其在氯化铯中的浮力密度为1.281g/ml。负染电镜观察,病毒粒子为均一的二十面体球形结构,直径约为40 nm。SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳分析表明DpTV的壳蛋白组成与NωV(Nudaureliaωvirus)非常相似,也是含两种壳蛋白,分子量约为62,500 Da和6,800 Da。DNase Ⅰ和RNaseA消化实验以及变性琼脂糖凝胶电泳结果显示,DpTV基因组由两条单链RNA分子组成(RNA1和RNA2),大小分别为5.5kb和2.5kb。DpTV的这些理化特性都符合T4病毒科松天蛾ω类似病毒属的分类特征。免疫分析表明DpTV和NωV之间具有抗原关系,说明这两者之间的亲缘关系较为密切,进一步证明了DpTV是T4病毒科松天蛾ω类似病毒属的一个新成员的分类地位。 为了了解DpTV的基因组结构以及从分子水平上对该病毒进行分类鉴定,我们提取了DpTV基因组RNA,采用随机引物合成cDNA,RT—PCR以及3’、5’RACE等方法测定了DpTV RNA1和RNA2的全核苷酸序列(Genbank编号:RNA1,AY594352;RNA2,AY594353)。RNA1的核苷酸序列共计5492个核苷酸,其中G+C含量为57.3%;RNA2的核苷酸序列共计2490个核苷酸,其中G+C含量为55.9%。DpTV基因组RNA 3’端没有poly(A)尾,而是由一个—CCA(-CCA box)盒取代。二级结构分析表明,DpTV基因组RNA3’端的核苷酸可以折叠成类似tRNA的二级结构,该tRNA类似结构不含植物病毒所具有的假结。序列分析表明DpTV RNA1有一个大的开放阅读框(open reading frame,ORF),该ORF起始于第一个起始密度码子AUG(nt 37—39),终止密码子为UGA(nt4984-4986),编码一个含1649个氨基酸残基,分子量为179,474Da的蛋白质(p180),等电点为8.10。DpTV RNA1的核苷酸序列比HaSV(Helicoverpa
论文目录:
第一章 前言
1.1 昆虫病毒
1.1.1 昆虫病毒的分类
1.1.2 昆虫病毒资源的识别鉴定
1.1.3 昆虫病毒分子生物学
1.1.4 昆虫病毒研究的意义
1.2 松毛虫和松毛虫病毒
1.2.1 松毛虫和马尾松毛虫
1.2.2 松毛虫和马尾松毛虫病毒
1.2.3 马尾松毛虫T4病毒
第二章 T4病毒科昆虫病毒
2.1 T4病毒科分类现状
2.2 T4病毒的血清学关系与缩主范围
2.2.1 血清学关系
2.2.2 宿主范围
2.3 T4病毒的特征性状
2.4 T4病毒的分子生物学
2.4.1 T4病毒基因组结构
2.4.2 T4病毒的基因组复制方式
2.4.3 T4病毒基因组RNA的二级结构
2.4.4 T4病毒壳蛋白序列分析及体外表达
2.5 T4病毒的结构与组装
2.5.1 T4病毒的形态结构
2.5.2 T4病毒的衣壳蛋白结构
2.5.3 T4病毒的粒子组装与成熟
2.6 T4病毒的病理学
2.6.1 T4病毒的感染症状
2.6.2 T4病毒的传染
2.6.3 组织特异性和组织病理学
2.7 T4病毒的进化
2.7.1 T4病毒之间的进化关系
2.7.2 T4病毒与其他病毒之间的进化关系
2.7.3 T4病毒及其宿主昆虫对阐明α类似病毒进化的意义
2.8 T4病毒的应用前景
2.8.1 T4病毒与生物杀虫剂
2.8.2 T4病毒与衣壳载体
第三章 松毛虫T4病毒的理化特性及血清学关系
3.1 引言
3.2 材料和方法
3.2.1 材料
3.2.2 方法
3.3 结果
3.3.1 病毒粒子的特征性状
3.3.2 病毒粒子的壳蛋白
3.3.3 病毒核酸的性质
3.3.4 DpTV与其它T4病毒之间血清关系的鉴定
3.4 讨论
第四章 松毛虫T4病毒RNA2的核苷酸序列测定及分析
4.1 引言
4.2 材料与方法
4.2.1 材料
4.2.2 方法
4.3 结果
4.3.1 cDNA片段的克隆及重组质粒的酶切鉴定
4.3.2 RT-PCR产物的克隆及重组质粒的酶切鉴定
4.3.3 DpTV RNA2 5’末端核苷酸序列的测定
4.3.4 DpTV RNA2 3’末端核苷酸序列的测定
4.3.5 DpTV RNA2的核苷酸序列及分析
4.4 讨论
第五章 松毛虫T4病毒RNA1的核苷酸序列测定及分析
5.1 引言
5.2 材料与方法
5.3 结果
5.3.1 cDNA片段的克隆及重组质粒的酶切鉴定
5.3.2 RT-PCR产物的克隆及重组质粒的酶切鉴定
5.3.3 DpTV RNA1 5’末端核苷酸序列的测定
5.3.4 DpTV RNA1 3’末端核苷酸序列的测定
5.3.5 DpTV RNA1的核苷酸序列及分析
5.4 讨论
研究总结
附录1 NωV RNA2的部分核苷酸序列
附录2 NωV RNA2编码的部分氨基酸序列
参考文献
在读期间发表的文章
致谢
发布时间: 2006-03-27
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