论文摘要
外环境中存在许多能模拟或干扰机体内分泌功能的化学物,影响体内激素的合成、分泌、运输、结合、作用、代谢或消除等环节,从而对个体的生殖、发育以及生物行为产生影响,表现出拟天然激素或抗天然激素的作用,这一类化合物统称为环境内分泌干扰物（Endocrine Disruptor Chemicals,EDCs）,可以对人体的生殖健康产生严重的影响。生殖健康包括了男女两个方面,由于女性的生殖过程远较男性复杂,但在有关生殖健康的研究中,有关环境污染物对女性健康影响的资料与男性相比相对较少。而女性在人类生殖的过程中,不仅提供繁衍生命的生殖细胞,还提供孕育生命的母体环境,因此保护女性的生殖健康对人类的繁衍具有重要意义。甲氧滴滴涕（methoxychlor,MXC）是一种替代滴滴涕的有机氯杀虫剂,其杀虫效果明显,生物毒性相对较低,在许多国家得到广泛应用。然而,近几年的研究表明,甲氧滴滴涕是确定的环境内分泌干扰物,可对雌性和雄性生殖内分泌产生影响。很多研究表明MXC对雄性生殖系统有破坏作用,但是对于雌性研究的较少。本课题通过构建雌性SD大鼠染毒模型,研究MXC对雌性大鼠性腺的毒性作用及卵巢抗氧化功能的影响,并观察了MXC对卵巢和子宫ER蛋白表达及垂体FSH表达的调节机制,为深入阐明MXC对雌性动物生殖功能的影响提供理论和实验依据。第一部分:甲氧滴滴涕染毒雌性SD大鼠模型的构建及对生殖内分泌的干扰作用使用雌性SD大鼠作为实验动物,3月龄,随机分为4组,每组10只,染毒剂量分别为0（对照）、16（低剂量）、32（中剂量）、64（高剂量）mg/（kg?d）,对照组给予等剂量芝麻油,所有实验大鼠均通过腹腔注射染毒,连续20d。每天用阴道脱落细胞涂片法连续观察并记录动情周期。染毒结束后于动情期将大鼠处死,观察指标包括体重,卵巢、子宫的脏器系数;放射免疫法测定血清中E2、P、FSH和LH的水平。免疫组化SP法观察雌激素受体（ER）在子宫和卵巢组织中的表达,免疫荧光染色观察FSH在垂体的表达;运用光镜和电镜观察卵巢组织和细胞超微结构的变化,计数各级卵泡及黄体数目。结果表明:①染毒前后各组体质量增加未见显著差异;②中高剂量染毒组动情期延长,周期数减少;③中高剂量组卵巢体质量及卵巢指数显著降低;④中、高剂量染毒组血清FSH和E2水平显著降低,P和LH与对照组比较无显著性差异;⑤中高剂量组闭锁卵泡显著增加,且次级卵泡闭锁率显著升高;⑥各组子宫内膜和卵巢ER蛋白的表达无显著性差异;⑦中高剂量组垂体FSH表达水平显著降低。结论:①甲氧滴滴涕可以使动情周期延长,卵泡闭锁增加,对雌性性腺产生毒性;②实验剂量的甲氧滴滴涕可以引起下丘脑-垂体-卵巢轴紊乱,降低垂体FSH表达水平,但并不是通过改变卵巢和子宫ER蛋白表达水平引起雌性性腺毒性的;③低剂量组未对雌性性腺产生明显的影响。第二部分:甲氧滴滴涕染毒对SD大鼠卵巢抗氧化系统功能的影响实验动物染毒模型构建同实验一,将雌性SD大鼠随机分为MXC 0、32、64mg/（kg?d）及MXC 64 mg+维生素E 20 mg/（kg?d）组。20 d后处死大鼠,用分光光度法测定其卵巢中超氧化物歧化酶（SOD）、还原型谷胱甘肽（GSH）的活力以及丙二醛（MDA）的含量;用RT-PCR法观察卵巢组织中超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）以及过氧化氢酶（CAT）等抗氧化酶mRNA的表达。结果表明:①中高剂量MXC组SOD、GSH活性显著下降,MDA含量升高,MXC64mg+维生素E20mg组SOD、GSH活性及MDA含量与对照组比较无显著性差异;②RT-PCR结果显示MXC中高剂量组卵巢中抗氧化酶（SOD、GSH-Px、CAT）mRNA表达均显著降低,MXC64mg+维生素E20mg组抗氧化酶mRNA表达与对照组比较无显著性差异。结论:①MXC可以对卵巢抗氧化系统产生影响,造成抗氧化酶活性降低,脂质过氧化增强;②维生素E可以对MXC引起的氧化应激损伤产生拮抗作用;③中高剂量组MXC引起卵泡闭锁可能是通过氧化应激产生。