BCR/ABL阴性的慢性骨髓增殖性疾病中JAK2V617F突变和PRV-1表达的研究

论文摘要

目的:BCR/ABL阴性的慢性骨髓增殖性疾病（cMPDs）主要包括真性红细胞增多症（PV）、原发性血小板增多症（ET）和原发性骨髓纤维化（IMF）。近期,在约90%的PV及一部分ET和IMF患者中发现了高致病性的获得性JAK2V617F点突变。JAK2是一种组成性酪氨酸激酶,能激活JAK-STAT信号传导途径。polycythemia rubra vera-1（PRV-1）是一种新的造血受体,研究报道在BCR/ABL阴性的cMPDs中PRV-1mRNA有异常高表达。但目前尚不清楚cMPDs中JAK2V617F突变和PRV-1mRNA高表达之间的关系以及二者对cMPDs临床特征的影响。本研究旨在探讨cMPDs中JAK2V617F突变和PRV-1mRNA的表达情况,进一步探讨BCR/ABL阴性的cMPDs的分子生物学发病机制,期望为JAK2V617F阳性的cMPDs患者提供更为特异的靶向治疗药物奠定理论基础。方法:实验对象包括62例BCR/ABL阴性的cMPDs患者（26例PV、26例ET、9例IMF、1例慢性中性粒细胞白血病）、20例慢性粒细胞白血病（CML）患者、11例急性白血病（AL）患者和12名健康志愿者。BCR/ABL阴性的cMPDs患者为研究组,其他为对照组。追踪记录比较各组患者的临床特征;应用等位基因特异性聚合酶链反应（AS-PCR）方法检测各组中JAK2V617F突变发生率,用DNA测序和聚合酶链反应—限制性片段长度多态性分析（PCR-RFLP）加以验证和分型;应用半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）技术检测各组中PRV-1mRNA的表达情况。结果:1用AS-PCR方法检测JAK2V617F的突变情况,显示在62例BCR/ABL阴性的cMPDs中有44例存在JAK2V617F点突变（阳性率为71.0%）,其中包括23/26例PV患者（阳性率88.5%）、15/26例ET患者（阳性率57.7%）、5/9例IMF患者（阳性率55.6%）和1例慢性中性粒细胞白血病（CNL）患者。而20例CML患者、11例AL患者和12名健康志愿者无一例存在JAK2V617F突变（阳性率均为0.0%）。BCR/ABL阴性的慢性骨髓增殖性疾病中JAK2V617F突变率和其他三组（CML组、AL组和正常对照组）相比均有统计学意义（P均<0.001）。PV组、ET组和IMF组的JAK2V617F突变率也不完全相同,X2=7.049,P=0.029。进一步两两组间比较,PV组和ET组的JAK2V617F突变率有统计学意义,X2=6.256,P=0.012。PV组和IMF组比较,突变率的差异无统计学意义,P=0.055。ET组和IMF组JAK2V617F突变率无统计学意义,P=1.000。2 AS-PCR方法检测发现的所有JAK2V617F突变阳性标本和随机抽取的10例阴性标本,又用DNA测序和PCR-RFLP方法进行验证,所发现的突变结果一致。同时将所有44例JAK2V617F阳性的标本根据突变情况分为T/T纯合子突变型和T/G杂合子突变型,44例中只有5例PV和1例IMF患者为T/T纯合子突变,其余均为T/G杂合子突变。所有突变阴性的野生型为G/G纯合子。3用RT-PCR技术检测PRV-1mRNA表达水平。各组中PRV-1mRNA表达情况:PRV-1mRNA相对表达水平各组资料经正态性检验和方差齐性检验,符合正态分布,且方差齐。经单因素方差分析F=15.572, P=0.000,各组间PRV-1相对表达水平不完全相同,进一步两两组间比较用LSD-t检验。在12例健康志愿者中, 2例不表达PRV-1mRNA,10例（83.3%）PRV-1mRNA表达阳性,基因表达水平（PRV-1/β-actin）范围为0.000-0.799,表达水平均数为0.387±0.231。在44例突变阳性的cMPDs患者中,42例（95.5%）表达PRV-1mRNA,基因平均表达水平（PRV-1/β-actin）为0.695±0.274,在18例突变阴性的cMPDs患者中,17例（94.4%）表达PRV-1mRNA,基因平均表达水平（PRV-1/β-actin）为0.403±0.168,JAK2V617F突变阳性组的PRV-1mRNA平均表达水平与JAK2V617F突变阴性的cMPDs组相比差异有统计学意义,P<0.001,且突变阳性的cMPDs患者的PRV-1mRNA表达水平明显高于CML患者（0.285±0.246）、AL患者（0.262±0.143）和正常对照（0.387±0.231）,P值均<0.001。但是没有JAK2V617F突变的BCR/ABL阴性的cMPDs患者与CML组、AL组和正常对照组相比,PRV-1表达水平均无显著差异,P均>0.05。对照组中,CML患者、AL患者与健康志愿者的PRV-1表达水平两两比较均无显著差异,P均>0.05。且BCR/ABL阴性的cMPDs各亚型（PV、ET和IMF）之间两两相比,PRV-1 mRNA表达水平也无显著差异,P均>0.05。4 JAK2V617F突变阳性组与突变阴性组临床特征的比较:JAK2V617F突变阳性的PV患者初诊时的白细胞计数（平均18.2×109/L）和血小板计数（平均479×109/L）显著高于突变阴性的PV患者（白细胞和血小板平均计数分别为7.6×109/L和277×109/L）,P均<0.05。ET患者中,突变阳性者初诊时的血红蛋白值（平均146g/L）和白细胞计数（平均14.6×109/L）显著高于突变阴性者（122g/L和10.9×109/L）,而且,突变阳性者有较高的并发症发生率,P值均<0.05。IMF患者中,有无突变者的临床特征无显著差异,P均>0.05。结论:1真性红细胞增多症、原发性血小板增多症和原发性骨髓纤维化患者中有较高的JAK2V617F突变率,在慢性粒细胞性白血病、急性白血病患者和健康志愿者中无一例存在JAK2V617F突变,说明JAK2V617F突变参与了BCR/ABL阴性的慢性骨髓增殖性疾病的发生,JAK2V617F可作为BCR/ABL阴性的慢性骨髓增殖性疾病的诊断和分类的重要的分子标记。2 JAK2V617F突变阳性的慢性骨髓增殖性疾病患者PRV-1 mRNA有异常过度表达,提示JAK2V617F突变与PRV-1 mRNA过度表达有关,可能为JAK2V617F激活了JAK-STAT信号传导通路所致。3用等位基因特异性聚合酶链反应（AS-PCR）技术检测JAK2V617F突变,敏感性高,准确、节资省时,与直接测序所得结果一致。因此,AS-PCR技术可以应用于临床实验室检测JAK2V617F点突变,为BCR/ABL阴性的慢性骨髓增殖性疾病的诊断、分型提供依据。4 JAK2V617F突变阳性的ET与突变阴性的ET患者相比,发病时血红蛋白和白细胞计数较高,有较高的并发症发生率,提示JAK2V617F突变阳性的ET更倾向于向PV转化, JAK2V617F突变可能为ET患者的不良预后因素,但需要对大宗病例进一步研究证实。

论文目录

• 中文摘要
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• 研究论文 BCR/ABL 阴性的慢性骨髓增殖性疾病中JAK2V617F 突变和PRV-1 表达的研究
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 附图
• 附表
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述 JAK2V617F 突变和PRV-1mRNA 高表达与慢性骨髓增殖性疾病
• 致谢
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