论文摘要
目的:幼年动物具有很强的颅骨缺损自行修复能力,当动物进入成年后这种能力很快消失。既往文献报道硬脑膜在颅骨再生中发挥了关键作用,其中幼年大鼠硬脑膜有一些独特的特点与颅骨缺损自行修复相关。但颅骨缺损自行修复过程中的分子生物学机制并不完全清楚,并且目前没有相关的蛋白质组学研究。材料与方法:1、采用双向电泳技术,对样品的处理、上样量、等电聚焦、SDS-PAGE电泳等步骤进行优化。2、应用双向电泳、质谱及Western-blot技术筛选并鉴定成年及幼年大鼠硬脑膜中差异表达的蛋白质。3、对大鼠硬脑膜细胞原代培养,观察硬脑膜细胞体外培养的细胞形态和细胞增殖活性;应用透射电子显微镜,对硬脑膜细胞超微结构进行观察比较。结果:1、获得重复性和分辨率比较好的成年及幼年大鼠硬脑膜蛋白双向电泳图谱;2、比较成年及幼年大鼠硬脑膜蛋白双向电泳图谱,发现24个差异表达蛋白质（丰度相差3倍以上）,鉴定出11个蛋白质（均为首次报道）,其中幼年大鼠硬脑膜蛋白上调的有:Cytoskeleton-associated protein 4,vimentin,typeⅡkeratin,β-actin,γ-actin,Apolipoprotein A-Ⅳprecursor,alpha-tropomyosin和TCTP1;成年大鼠硬脑膜蛋白上调的有:COMM domain containing 7,albumin和RAB5-interacting protein;3、Western-blot结果显示在幼年大鼠硬脑膜vimentin,tropomyosin,β-actin和γ-actin水平分别是成年大鼠硬脑膜的3.2,2.4,3.6和2.2倍,这与双向电泳/质谱结果一致;4、在体外培养中,成年硬脑膜细胞于10～15天后呈贴壁生长,25～30天出现细胞融合。幼年硬脑膜细胞于5～8天后呈贴壁生长,12～15天出现细胞融合。5、成年大鼠硬脑膜细胞呈梭形,细胞核狭长,细胞核质比约为1:2.5～3,细胞器比较发达,胶原排列整齐、致密;幼年大鼠硬脑膜细胞呈椭圆形,细胞核比较丰满,细胞核质比约为1:1.3～1.5,细胞器比较不发达,细胞外基质不丰富。结论:1、.在标准操作流程和条件下,优化双向电泳关键技术是获得重复性和分辨率较好的双向电泳图谱的必要条件。2、成年及幼年大鼠硬脑膜存在11种差异蛋白,为从整体上认识幼年动物具有很强颅骨缺损自行修复能力的分子机制提供了实验和理论基础。3、成年及幼年大鼠硬脑膜细胞增殖能力以及成年及幼年大鼠硬脑膜超微结构差异较大。
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