EGCG诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡及其机制研究

论文摘要

目的:宫颈癌是严重威胁我国妇女健康的恶性肿瘤之一。化疗提高了中晚期宫颈癌患者的缓解率,但由于其毒副作用和肿瘤细胞耐药,部分患者临床疗效难尽人意。本研究旨在探讨表没食子儿茶素没食子酸酯（Epigallocatechin-3-gallate,EGCG）体外诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡及其机制,为开发与寻找新药提供实验依据。方法:采用MTT法检测EGCG抑制HeLa细胞生长的IC50值;通过普通光镜、平皿克隆和绘制细胞生长曲线观察EGCG对HeLa细胞生长的抑制作用; Hochest33258染色法、流式细胞仪及DNA凝胶电泳法检测EGCG诱导HeLa细胞凋亡的情况;采用RT-PCR、免疫细胞化学染色和Western-blotting检测了Caspase-3基因和蛋白的表达;同时运用Western-blotting检测活化Caspase-3蛋白和裂解的PARP-1蛋白的表达情况;另外,选用免疫细胞化学染色观察PARP-1蛋白在EGCG处理HeLa细胞后胞核与胞浆的表达。结果:1、EGCG抑制HeLa细胞生长的IC50值为36.82mg·L-1;2、普通光镜观察、平皿克隆和细胞生长曲线结果显示,随着EGCG浓度增加,处理时间延长,对HeLa细胞生长抑制作用不断增加,且呈浓度依赖性（n=3, P<0.05）;3、Hochest33258染色结果显示,EGCG处理HeLa细胞中出现了典型的凋亡形态学改变如核碎裂、核浓缩等。与对照组比较,随着EGCG浓度的增加,凋亡细胞数不断增多（n=3, P<0.05）。4、流式细胞仪检测结果显示,经EGCG处理后,随着浓度的升高,HeLa细胞的凋亡率逐渐增加,呈浓度依赖性诱导HeLa细胞的凋亡（n=3, P<0.05）。5、DNA琼脂糖凝胶电泳检测结果显示,EGCG处理HeLa细胞后可见DNA梯形条带,且随着浓度升高,条带越明显。6、RT-PCR检测结果显示,随着ECGC浓度的升高,Caspase-3基因的表达逐渐增强（P<0.05）。7、Western-blotting检测结果显示,随着EGCG浓度的升高,HeLa细胞中Caspase-3蛋白的表达逐渐增加（P<0.05）,EGCG呈浓度依赖性诱导HeLa细胞中Caspase-3蛋白的表达。8、免疫细胞化学染色检测结果显示,Caspase-3蛋白主要在HeLa细胞浆中表达,且随着EGCG浓度的升高,其表达也逐渐增加（P<0.05）。9、Western-blotting结果显示,随着EGCG浓度的升高,HeLa细胞中活化Caspase-3蛋白和裂解的PARP-1蛋白表达均逐渐增加（P<0.05）。10、免疫细胞化学染色结果显示,PARP-1蛋白在HeLa细胞核与胞浆表达,随着EGCG浓度的升高,PARP-1蛋白在胞浆中的表达量逐渐增加而胞核中含量减少（P<0.05）。结论:1、EGCG体外呈剂量依赖性抑制宫颈癌HeLa细胞生长。2、EGCG体外可诱导HeLa细胞凋亡。3、EGCG呈浓度依赖性上调Caspase-3的表达,促进PARP-1裂解,导致细胞凋亡,发挥其对HeLa细胞生长的抑制作用。

论文目录

• 中文摘要
• ABSTRACT
• 英文缩写注解
• 前言
• 技术路线
• 材料
• 方法
• 结果
• 讨论
• 参考文献
• 结论
• 综述
• 参考文献
• 攻读学位期间主要的研究成果
• 致谢