论文摘要
背景：输尿管梗阻在泌尿外科较常见,若治疗不及时,梗阻侧肾脏则向间质纤维化方向发展,最终临床表现为肾功能衰竭,这也是其它慢性进展性肾脏疾病共同且不可逆转的病理生理改变。而在动物实验中,单侧输尿管梗阻模型（unilateral ureteral obstruction, UUO）也是实验人员研究肾间质纤维化（renal interstitial fibrosis, RIF）和慢性肾脏病常用的理想模型。最近几年来,间充质干细胞（mesenchymal stem cells, MSCs）在各种肾脏疾病的治疗研究领域中取得了突破性的进展,并且表现出可观的临床应用前景。然而移植后的MSCs在体内的定植、分布情况以及其产生的疗效是很多研究人员所面临的问题。生物发光活体成像分析系统（in vivo imaging system, I VIS）可以对特殊标记的活细胞在动物体内的长期转归进行追踪,因此它可以对同一实验对象施加处理因素前后的全程进行观察记录,采集到的数据更加真实、可信,同时也大大减少了多个观察时间点处死动物的数量。目的：通过建立可复性单侧输尿管梗阻（reversable unilateral ureteral obstruction, R-UUO）的小鼠模型来模拟临床输尿管梗阻病人经手术解除梗阻后的病理生理特征,采用肾动脉移植的方式将同时标记有荧光素酶基因和绿色荧光蛋白基因的小鼠骨髓间充质干细胞（luciferase and GFP labeled MSCs, Luc-GFP-MSCs）移植入体内,结合小动物活体成像技术对MSCs在体内的归巢情况进行观察、分析,最后应用免疫组化和实时定量PCR技术评价MSCs对梗阻所致RIF的作用,为后续实验研究的开展以及临床应用提供实验依据。创新点：1、目前国内外尚未检索到关于MSCs经肾动脉移植对可复性单侧输尿管梗阻所致肾间质纤维化的作用方面的研究；2、率先采用IVIS新技术更直观的跟踪、观察Luc-GFP-MSCs在小鼠梗阻侧肾脏的归巢情况。方法：1、4W龄SPF级雌性Balbc小鼠36只,采用随机数字表法将其分为三个实验组：PBS组、MSCs组和Sham组,每组12只,每个时间点各6只；2、转染、培养BALB/c小鼠Luc-GFP-MSCs;3、PBS组和MSCs组均用显微血管夹（0.4to1.0mm; S&T Fine Science Tools, Foster City, CA）行左侧输尿管梗阻10天后解除,建立小鼠R-UUO模型。Sham组只游离左侧输尿管而不梗阻；4、PBS组、MSCs组在解除梗阻的同时,分别经左肾动脉移植50μl PBS （PBS组）或50μ1含1×106个MSCs （MSCs组）的细胞悬液；5、在移植MSCs后的1、3、7、14、28天,对三个实验组进行活体生物发光成像,为了验证体内左侧肾脏生物发光成像的结果,分别在MSCs移植后的第3、7天取左侧肾脏进行冰冻切片。6、MSCs移植后第1W和第4W时,对各实验组的E-cadherin、α-SMA、TGF-β1、 TNF-α进行DNA表达量的测定,最后使用SPSS18.0统计软件分析。结果：1、转染后的小鼠MSCs状态良好,发光强度与细胞数量成相关性增加；2、成功建立了小鼠可复性单侧输尿管梗阻模型,并提高了模型的均衡性和稳定性；3、建立并完善了肾动脉移植方式的技术内容；4、生物发光成像：PBS组和Sham组均未检测到特异性信号；MSCs组在移植后的第1、3、7天均可检测到集中在梗阻侧肾脏所在区域的特异性光信号,而且信号强度在第3天时增强,至第7天时减弱,待第14天时特异性信号消失；5、DNA表达量：1W时,PBS组和MSCs组之间,各基因表达量差异无统计学意义（P>0.05）,但均与Sham组有统计学差异（P<0.01）；4W时,PBS组和MSCs组的TGF-β1无统计学差异（P>0.05）,但均与Sham组有统计学差异（P<0.01）, E-cadherin、α-SMA、TNF-α各基因表达量三个组之间差异均有统计学意义（P<0.01）。结论：1、MSCs可以归巢至梗阻侧肾脏；2、肾动脉移植MSCs对梗阻所致的肾间质纤维化有改善作用；
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标签：间充质干细胞论文; 可复性单侧输尿管梗阻论文; 移植方式论文; 活体成像系统论文; 归巢论文; 肾间质纤维化论文;