小刺猴头菌液体深层发酵浸膏糖类物质药理学活性研究

小刺猴头菌液体深层发酵浸膏糖类物质药理学活性研究

论文摘要

目的:本实验选取小刺猴头菌液体深层发酵浸膏为实验原料,经热水提取,乙醇沉淀得到小刺猴头菌大分子糖组分(HFP)及小分子糖组分(HFA),并进行了抗肿瘤、升白、抗氧化及抑菌等药理学活性的初步研究,为更全面、更深入地认识和合理开发小刺猴头菌这一我省特色珍稀药用真菌资源奠定基础。方法:1.体外抗肿瘤试验:采用体外细胞培养的方法,通过MTT法观察不同浓度的HFP和HFA对人肝癌细胞SMMC7721、人肺腺癌细胞SPC-a-1、人胃癌细胞SGC7901等三种肿瘤细胞株增殖活性的影响,以分析HFP和HFA的抗肿瘤活性。2.体内抗肿瘤试验:通过建立小鼠移植性S180实体瘤模型,观察HFP的抑瘤率以及对体重变化情况、脾系数和胸腺系数的影响。3.HFP和HFA的抗氧化活性的研究:采用铁氰化钾一三氯乙酸法测定总还原力,邻苯三酚法测定超氧阴离子自由基清除率,Fe2+/H2O2法测定羟基自由基清除率。观察HFP和HFA的总还原能力、清除超氧阴离子自由基和羟基自由基的能力。4.通过建立小鼠白细胞减少模型,观察HFP对由CTX所致白细胞减少的小鼠的外周血白细胞数、骨髓有核细胞数以及小鼠脾系数和胸腺系数的影响。5.通过对腹泻小鼠致病菌的分离,观察HFP对体外生长的肠道菌生长活性的影响。结果:1.体外抗肿瘤实验:HFP和HFA对体外培养的人肝癌细胞SMMC7721、人肺腺癌细胞SPC-a-1和人胃癌细胞SGC7901均表现出一定的抗肿瘤活性,但其抑制活性受细胞种类、给药剂量、作用时间等因素影响。二者对人肺腺癌细胞SPC-a-1的最大抑制率高于人胃癌细胞SGC7901和人肝癌细胞SMMC7721;对于同一种肿瘤细胞;高给药剂量的抑瘤作用优于低给药剂量;长时间给药略优于短时间给药。2.体内抗肿瘤实验:HFP可抑制小鼠体内S180实体瘤的生长,且预防组的抑瘤率高于治疗组,高剂量组的抑瘤效果好于低剂量组。并且HFP组的脾系数和胸腺系数明显高于CTX组。3.抗氧化实验:HFP和HFA均有一定的体外抗氧化活性,且相同浓度下,HFP的抗氧化作用优于HFA。4.HFP对CTX所致的白细胞减少有拮抗作用,同时可缓解CTX造成的骨髓有核细胞数下降,及脾和胸腺受到的抑制。但HFP单独使用的效果不如多种不同来源的多糖(强力康颗粒)共同作用。5.比浊法的结果证实:HFP可抑制大肠杆菌体外生长,进一步对其MIC的测定结果为40mg/ml。以上实验结果表明:小刺猴头菌液体深层发酵浸膏具有广泛的药理学活性,其有效成分为糖类物质,并且大分子糖组分表现出的生物学活性好与小分子糖组分。

论文目录

  • 摘要
  • Abstract
  • 第一章 引言
  • 1 药用真菌药理学研究概述
  • 1.1 抗肿瘤及增强机体免疫功能作用
  • 1.2 抗衰老和抗氧化活性
  • 1.3 抗消化道溃疡和炎症
  • 1.4 抑菌和抗病毒活性
  • 1.5 预防心血管系统疾病
  • 1.6 降血糖、降血脂
  • 1.7 利胆、保肝解毒
  • 1.8 抗突变、抗辐射作用
  • 2 药用真菌抗肿瘤活性及其作用机制的研究进展
  • 2.1 增强宿主机体免疫功能
  • 2.2 直接杀伤肿瘤细胞及诱导肿瘤细胞凋亡
  • 2.3 抗氧化作用
  • 3 研究目的和意义
  • 第二章 材料与试剂
  • 1 实验材料、试剂和仪器
  • 1.1 实验材料
  • 1.2 细胞株及实验动物
  • 1.3 主要试剂及药品
  • 1.4 主要仪器
  • 2 试剂配制
  • 2.1 体外抗肿瘤实验
  • 2.2 体内抗肿瘤实验
  • 2.3 抗氧化实验
  • 2.4 体外抑菌实验
  • 第三章 小刺猴头菌发酵浸膏大分子糖组分和小分子糖组分的制备
  • 1 实验方法
  • 1.1 小刺猴头菌发酵浸膏大分子量糖组分和小分子糖组分的提取工艺
  • 1.2 糖含量的测定
  • 2 实验结果
  • 2.1 标准曲线的绘制
  • 2.2 HFP和HFA的糖含量测定结果
  • 第四章 抗肿瘤实验
  • 1 实验方法
  • 1.1 肿瘤细胞培养
  • 1.2 MTT法检测HFP和HFA体外抑制肿瘤细胞增殖实验
  • 1.3 HFP体内抑制小鼠S180实体瘤生长实验
  • 2 实验结果
  • 2.1 MTT法检测HFP和HFA体外抑制肿瘤细胞增殖的实验结果
  • 2.2 HFP体内抑制小鼠S180实体瘤生长的实验结果与分析
  • 第五章 升高白细胞及提高机体免疫机能实验
  • 1 实验方法
  • 1.1 分组、建模及给药
  • 1.2 白细胞计数
  • 1.3 骨髓有核细胞计数
  • 1.4 脾系数和胸腺系数的测定
  • 1.5 数据处理
  • 2 实验结果
  • 2.1 HFP升高小鼠外周血白细胞总数的实验结果
  • 2.2 骨髓有核细胞数
  • 2.3 胸腺系数及脾系数
  • 第六章 抗氧化实验
  • 1 实验方法
  • 1.1 还原力的测定方法
  • 1.2 超氧阴离子自由基清除率的测定方法
  • 1.3 羟基自由基清除率的测定方法
  • 2 实验结果
  • 2.1 HFP和HFA的总还原力
  • 2.2 HFP和HFA对超氧阴离子自由基的清除率
  • 2.3 HFP和HFA清除羟基自由基自由基的能力
  • 第七章 抑菌实验
  • 1 实验方法
  • 1.1 肠道菌来源及分离
  • 1.2 革兰氏染色
  • 1.3 生化鉴别实验
  • 1.4 比浊法测定HFP对肠道菌生长情况的影响
  • 1.5 平板稀释法测定最小抑菌浓度
  • 2 实验结果
  • 2.1 大鼠肠道菌的分离
  • 2.2 革兰氏染色结果
  • 2.3 生化鉴别实验结果
  • 2.4 比浊法实验结果
  • 2.5 MIC的测定结果
  • 第八章 讨论
  • 第九章 结论
  • 参考文献
  • 附图
  • 致谢
  • 相关论文文献

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