刺芹侧耳的细胞工程育种及栽培研究

论文摘要

食用菌具有高蛋白,低脂肪的特点,属于“天然,营养,多功能”食品,符合近年来国际上对食品提出的“低盐,低糖,低脂肪,高蛋白”的新要求,随着人们对食用菌营养价值及药用价值的认识,食用菌育种工作也成为科研工作者关注的热点。原生质体技术是食用菌育种工作的重要方法之一,因其具有操作简单,容易获得,且对诱变因子较敏感等优点,被广泛应用于各种食用菌的育种工作中。本文以刺芹侧耳为出发菌株,通过原生质体技术结合紫外线诱变获得再生变异菌株269株,探索了适合刺芹侧耳原生质体形成与再生的条件,得出适宜条件为“菌龄96h,酶解温度30℃,酶解时间2 h,酶系统为1%纤维素酶+1%蜗牛酶的混合酶,在该条件下,刺芹侧耳原生质体产量达到较高水平,产量为1.75×107个/mL。再生过程中,以0.6 mol/L的甘露醇做渗稳剂,能使原生质体再生率达4.8%,明显优于蔗糖和MgSO4。由原生质体紫外诱变可知,刺芹侧耳原生质体对紫外线的作用非常敏感,低剂量就能达到较高致死率,致死率在70%-80%时,正变率较高,因此选择致死率80%,照射时间15 s为适宜的紫外诱变时间。通过对再生变异菌株长势、长速、拮抗程度等方面的实验,筛选出长速优于出发菌株的再生变异菌株。通过对再生菌株发酵过程中生物量、pH值、还原糖含量、胞外酶活性等指标的检测,筛选出一株长速快、生物量高、利用还原糖能力好、胞外酶活性高的的优良菌株08X-013,酯酶同工酶分析可知菌株08X-013谱带表达不同于出发菌株,表明该菌株发生了遗传变异,是一株发酵性能良好的再生变异菌株。通过栽培试验可知菌株08X-013满袋、现蕾、出菇时间均比出发菌株提前,生物学效率达到65.2%,与出发菌株相比,增产率达到了11.8%,各项农艺性状优良,是一株高产优质的再生变异菌株。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第1章 文献综述
• 1.1 引言
• 1.2 食用菌产业的优势
• 1.2.1 食用菌的营养及药用价值
• 1.2.2 食用菌的经济价值
• 1.3 刺芹侧耳概述
• 1.3.1 刺芹侧耳营养及药用价值
• 1.3.2 刺芹侧耳国内外研究现状
• 1.4 食用菌育种技术
• 1.4.1 自然选育
• 1.4.2 诱变育种
• 1.4.3 杂交育种
• 1.4.4 基因工程育种
• 1.5 食用菌的液体发酵
• 1.5.1 液体菌种
• 1.5.2 利用发酵产物制备药物,保健品等
• 1.5.3 提取代谢产物
• 1.6 酯酶同工酶技术
• 1.7 本试验的内容
• 第2章 刺芹侧耳原生质体制备及再生条件研究
• 2.1 引言
• 2.2 实验材料
• 2.2.1 供试菌株
• 2.2.2 培养基
• 2.2.3 实验试剂
• 2.2.4 实验仪器
• 2.3 实验方法
• 2.3.1 酶液制备
• 2.3.2 菌丝培养
• 2.3.3 原生质体制备
• 2.3.4 原生质体再生
• 2.3.5 原生质体制备再生条件优化
• 2.3.6 原生质体紫外诱变
• 2.4 结果与分析
• 2.4.1 原生质体的生成
• 2.4.2 酶系统对刺芹侧耳原生质体产量的影响
• 2.4.3 菌龄对刺芹侧耳原生质体产量的影响
• 2.4.4 酶解温度对刺芹侧耳原生质体产量的影响
• 2.4.5 酶解时间对刺芹侧耳原生质体产量的影响
• 2.4.6 渗透压稳定剂对刺芹侧耳原生质体再生的影响
• 2.4.7 紫外诱变时间对刺芹侧耳原生质体再生的影响
• 2.4.8 刺芹侧耳原生质体制备的正交筛选实验
• 2.5 小结
• 第3章 刺芹侧耳再生变异菌株的筛选
• 3.1 引言
• 3.2 实验材料
• 3.2.1 供试菌株
• 3.2.2 培养基
• 3.2.3 实验仪器
• 3.3 实验方法
• 3.3.1 再生变异株的初筛
• 3.3.2 再生变异株的复筛
• 3.4 结果与分析
• 3.4.1 刺芹侧耳再生变异株的初筛
• 3.4.2 刺芹侧耳再生变异株的复筛
• 3.5 小结
• 第4章 刺芹侧耳再生变异菌株液体发酵性能研究
• 4.1 引言
• 4.2 实验材料
• 4.2.1 供试菌株
• 4.2.2 培养基
• 4.2.3 实验试剂
• 4.2.4 实验仪器
• 4.3 实验方法
• 4.3.1 再生变异株在液体培养基中的初筛
• 4.3.2 再生变异株在液体培养基中的复筛
• 4.4 结果与分析
• 4.4.1 再生变异株在液体培养基中的初筛
• 4.4.2 再生变异株在液体培养基中的复筛
• 4.5 小结
• 第5章 刺芹侧耳再生变异菌株栽培研究
• 5.1 引言
• 5.2 实验材料
• 5.2.1 供试菌株
• 5.2.2 培养基
• 5.3 实验方法
• 5.4 结果与分析
• 5.4.1 复筛菌株生长周期比较
• 5.4.2 复筛菌株产量比较
• 5.4.3 复筛菌株农艺性状比较
• 5.5 小结
• 第6章 刺芹侧耳再生变异菌株酯酶同工酶分析
• 6.1 引言
• 6.2 实验材料及仪器
• 6.2.1 供试菌株
• 6.2.2 实验仪器
• 6.3 实验方法
• 6.3.1 试剂配制
• 6.3.2 样品制备
• 6.3.3 分离胶的制备
• 6.3.4 浓缩胶的制备
• 6.3.5 电泳
• 6.3.6 取胶
• 6.3.7 染色
• 6.3.8 数据处理
• 6.4 结果与分析
• 6.5 小结
• 结论
• 参考文献
• 致谢