细菌水解人参皂苷20-O-糖基的研究

论文摘要

人参二醇类皂苷Rg3具有抗癌抗肿瘤的功效,Rh2是人参中抗癌性最强的活性成分,人参三醇类皂苷Rg2可以抑制血小板凝聚,Rh1具有抑制癌细胞增殖的作用,都具有很高的生理活性与药用价值。本论文主要研究了利用微生物酶转化法将一般参制品中含量较高的二醇、三醇皂苷转化为人参皂苷Rg3、Rh2、Rg2、Rh1,即水解相应的20-0-葡萄糖基来得到所需要的人参皂苷,并进行Rg3、Rh2粗产品的分离提纯及精制。本实验先对一种从人参土壤中筛选出的No.3细菌进行了发酵培养,采用TLC酶活力检测法在条件方面进行了研究,将提取后的粗酶液作用于人参二醇皂苷（PPD）,初步确定适宜反应条件为20 ℃,以Rbi为底物时反应12 h,底物浓度0.01%,以Rb2为底物时反应20 h,底物浓度为0.1%;作用于人参三醇皂苷（PPT）,初步确定适宜反应条件为30 ℃,反应12 h,以Re为底物,底物浓度选择0.1%,以Rg1为底物,底物浓度选择0.01%。在以上适宜条件下对酶反应前后皂苷进行HPLC检测,计算底物的转化率为 20%。实验还着力于酶转化法得到的人参皂苷Rg3、Rh2粗产品的提纯。实验采用AB-8大孔吸附树脂吸附分离Rg3、Rh2达到脱糖、去无机离子,再通过硅胶柱精细分离,进一步提纯,得到高纯度的产品。18.8 g酶转法得到的粗品稀有皂苷经过AB-8大孔吸附树脂吸附分离和硅胶柱进一步提纯分别得到较纯Rh2 0.75 g,Rg3产品3.2 g及其它混合产品。其中Rh2和Rg3的总含量分别为4%和17%,其中含20（S）-Rh2 80%。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 文献综述
• 1.1 人参
• 1.1.1 人参的形态
• 1.1.2 人参的种类
• 1.1.3 人参生长环境
• 1.1.4 人参的化学成分
• 1.2 人参皂苷
• 1.2.1 人参皂苷
• 1.2.1.1 原人参二醇型皂苷
• 1.2.1.2 原人参三醇型皂苷
• 1.2.1.3 齐礅果酸型皂苷Ro
• 1.2.2 人参皂苷的含量
• 1.2.3 人参皂苷的药理作用
• 3药理作用'>1.2.4 人参皂苷Rg₃药理作用
• 3'>1.2.4.1 人参皂苷Rg₃
• 3和20（R）-人参皂苷Rg₃'>1.2.4.2 20（S）-人参皂苷Rg₃和20（R）-人参皂苷Rg₃
• 2药理作用'>1.2.5 人参皂苷Rh₂药理作用
• 1药理作用'>1.2.6 人参皂苷Rh₁药理作用
• 1.2.7 人参皂苷的生物转化
• 1.3 本论文的主要内容
• 第二章 材料与方法
• 2.1 实验材料
• 2.1.1 菌种
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 菌株的发酵培养
• 2.2.2 菌种发酵条件的确定方法
• 2.2.3 酶的提取
• 3粗产品的分离提纯'>2.2.4 Rg₃粗产品的分离提纯
• 2.2.5 薄层层析（TLC）
• 2.2.6 高效液相色谱（HPLC）
• 第三章 结果与讨论
• 3.1 sp.3菌发酵转化人参二醇类皂苷途径研究
• 3.1.1 诱导物的确定
• 3.1.2 反应温度的确定
• 3.1.3 反应时间的确定
• 3.1.4 底物浓度的确定
• 3.2 sp.3菌转化人参三醇类皂苷反应条件的研究
• 3.2.1 诱导物的确定
• 3.2.2 反应温度的确定
• 3.2.3 反应时间的确定
• 3.2.4 底物浓度的确定
• 3.3 HPLC检测酶解产物的组成
• 3和Rh₂的分离提纯'>3.4 酶反应产物Rg₃和Rh₂的分离提纯
• 3.4.1 粗制品的制备
• 3.4.2 AB-8柱分离结果
• 3.4.3 硅胶柱分离结果
• 2的快速拆分法'>3.4.4 20（R）, 20（S）-Rh₂的快速拆分法
• 第四章 结论
• 参考文献
• 致谢