论文摘要
阿胶作为一种重要的中药已被发现具有多种功效,前期研究发现驴血清白蛋白为阿胶中重要的蛋白质组分之一,本课题主要研究源于驴血清白蛋白的生物活性肽HP-6,通过验证其功能活性,一方面为阿胶的药理研究提出新的思路,另一方面为其实际应用奠定理论基础。在此基础上,进一步探讨驴血清酶解物的功能,为驴血清的开发利用进行初步探索。体外试验研究肽HP-6对小鼠骨髓细胞及HL-60、HepG-2细胞增殖的影响,结果发现:1.肽HP-6可促进小鼠骨髓基质细胞增殖,在0.15μmol·L-1浓度时具最高增殖率(63.52±3.94)%,对小鼠骨髓悬浮细胞促增殖作用最高为0.015μmol·L-1时的(24.66±3.70)%;2.激光共聚焦显微术进行初步机理探讨,发现肽HP-6与小鼠骨髓细胞相互作用的靶标物质极有可能在细胞质内;3.小鼠骨髓CFU-E集落培养中发现低浓度的肽HP-6对于红细胞分化具有促进作用;4. HL-60细胞、HepG-2细胞及HepG-2集落的作用中,发现肽HP-6对这两种癌细胞增殖无促进作用,可见肽HP-6刺激细胞增殖时具有选择性。体内试验建立了失血性贫血小鼠模型和环磷酰胺致贫血模型,观察肽HP-6对这两种贫血模型的影响,结果发现肽HP-6可增强小鼠造血功能,并能够辅助小鼠造血系统抵抗化疗药物损伤。对小鼠生长发育影响研究中发现该肽可促进肝脏、肺脏发育,且未见长期生物毒性。胰蛋白酶水解驴血清初步的条件优化,发现在预处理温度85℃、初始pH9、单位体积未稀释驴血清的胰蛋白酶使用量2500U·mL-1、酶解温度55℃和酶解时间9h的条件下,本试验的驴血清可被有效降解,而酶解5h和7h的酶解物具有最好的刺激小鼠骨髓基质细胞增殖活性。动物试验结果表明,驴血清与胰蛋白酶的反应产物对于小鼠是安全无害的,可以在一定程度上促进小鼠的体重增长以及各主要脏器的发育,在大多数情况下,驴血清与灭活胰蛋白酶作用产物具有更好的促进效果,而对于肺部的发育,驴血清胰蛋白酶酶解物却有更好的作用。综上所述,通过生物信息学手段获得源于驴血清白蛋白的生物活性肽HP-6具有类似阿胶补血的功能,而富含驴血清白蛋白的驴血清酶解后也具有与肽HP-6相类似的功能。
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