论文摘要
一、研究背景近年来,胰岛素抵抗（Insulin resistance, IR）在高血压（Essential hypertension, EH）的发病机理中作用日益受到关注,50%左右的EH患者存在不同程度的IR。IR患者体内伴有代偿性高胰岛素血症。在IR和高胰岛素血症引起EH的众多病理生理改变中,血管平滑肌细胞（Vascular smooth muscle cells, VSMCs）异常增殖尤为引人注目,它通过引起阻力血管收缩力增加、顺应性下降、血管壁硬化、外周血管阻力增加参与高血压发生发展。胰岛素作为一种体液因子,与VSMCs增殖和凋亡密切相关,胰岛素可通过胰岛素受体底物磷酸化,进而激活一系列信号途径直接刺激血管平滑肌细胞增殖,亦可通过血管紧张素、胰岛素生长因子I等促血管增殖因子间接发挥作用。此外在EH的病人中,胰岛素水平升高和VSMCs过度增殖亦呈正相关。我们既往的研究已证实胰岛素对VSMCs具有直接促增殖作用,该作用呈现浓度依赖性。多巴胺系统在血压调节中的作用逐渐受到重视。多巴胺受体隶属G蛋白偶联受体,根据其结构和药理学特性不同分为两类,即D1类受体（包括D1和D）5)和D2类（包括D2、D3、D）4)受体亚型。多巴胺受体的利钠排尿作用已得到基因敲除小鼠实验结果的支持,多巴胺受体的5个亚型,无论敲除何种受体亚型均引起基因敲除小鼠血压明显增高,D1、D3、D)5受体基因敲除小鼠伴有尿钠排泄功能障碍。D3多巴胺受体作为D2类多巴胺受体主要亚型,在肾脏及动脉系统均有表达,起着舒张血管、利钠排尿的作用。我们以往的研究工作发现D1类以及D3受体本身对VSMCs增殖并无影响,但刺激这些受体可抑制去甲肾上腺素对VSMCs的促增殖作用。胰岛素受体参与血管平滑肌细胞增殖已得到公认,多巴胺D3受体与胰岛素受体共存于血管平滑肌细胞,D3受体对血管平滑肌上胰岛素受体的功能和表达是否存在影响?通过何种机制发挥作用?结合我们既往的研究,我们推测:多巴胺D3受体对胰岛素受体表达有调节作用,并参与胰岛素受体介导的促VSMCs增殖过程。二、研究目的主要从细胞水平明确D3受体对血管平滑肌上胰岛素受体的功能和表达的影响,以及这种作用在WKY （Wistar-Kyoto,正常血压对照大鼠）和（Spontaneously hypertensive rat, SHR ）的区别。三、研究方法1.胸主动脉平滑肌（A10）细胞的培养;2.细胞增殖试验采用[3H]-TdR,MTT,细胞计数;3. Westernblot以及RT-PCR分析D3受体对胰岛素受体表达的调节及机制;4. WKY和SHR原代VSMCs培养,观察D3受体对胰岛素受体功能和表达的调节在WKY及SHR上的区别,探讨该调节作用与EH发生的关系。四、研究结果1、胰岛素促进A10细胞增殖呈浓度依赖性;尽管D3受体本身对A10细胞增殖没有影响,但在D3受体激动剂PD128907和胰岛素共同刺激A10细胞的情况下,PD128907可抑制胰岛素介导的促A10细胞增殖作用,此作用亦呈浓度依赖性。2、刺激D3受体,经过PKA信号途径,对胰岛素受体表达产生抑制作用。D3受体特异性阻断剂可阻断D3受体对胰岛素受体的下调作用,说明了D3受体激动剂PD128907的特异性,这一作用是经过D3受体完成的。3、刺激D3受体对胰岛素受体的功能和表达的抑制作用在WKY和SHR的原代VSMCs没有明显区别。但是,刺激D3受体对胰岛素介导的VSMCs增殖效应和胰岛素受体的表达在SHR中仍然高于WKY。五、结论刺激D3受体抑制胰岛素受体表达和增殖功能,该抑制作用在WKY和SHR之间无明显区别,提示血管D3受体在高血压状态下仍然发挥作用,对血管D3受体的干预有望成为抵抗高血压状态下高胰岛素血症对血管危害的手段。