重金属铜单克隆抗体的制备及免疫学检测方法的建立

论文摘要

目的：制备出高效价、高亲和力Cu2+的单克隆抗体,并对抗体的各项指标进行鉴定,初步建立起Cu2+的间接竞争ELISA和胶体金免疫层析试纸条的方法,从而为以后建立重金属铜离子的免疫学快速检测体系奠定基础。方法：因Cu2+是小分子物质,其本身不具有免疫原性,我们利用双功能螯合剂p-SCN-Bn-DTPA将Cu2+螯合后分别与载体蛋白牛血清白蛋白（BSA）和鸡卵清白蛋白（OVA）偶联,制备出完全抗原（免疫抗原和检测抗原）。并以Cu-DTPA-BSA作为免疫原免疫BALB/c小鼠,以Cu-DTPA-OVA作为检测抗原。应用杂交瘤技术制备抗Cu2+的单克隆抗体。并对单克隆抗体的效价、亚类、亲和力、特异性等方面进行鉴定,进而初步建立了检测重金属铜的间接竞争ELISA和胶体金免疫层析检测方法。结果：通过筛选成功获得三株稳定分泌Cu2+的单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其中在抗Cu2+的三个细胞株中4C2F10细胞株分泌的抗体的评价较好,其分泌的抗体属于IgG1,相对亲和力系数为3.37±0.31×109M-1,该单抗与载体蛋白OVA无交叉反应,与Co2+、Zn2+分别存在17.5%,8.75%的交叉反应,与其他重金属离子的交叉反应均小于2%,初步建立了检测重金属铜的间接竞争ELISA方法的最低检测限（LOD）为2ng/mL, IC50为12.5 ng/mL;胶体金试纸条的最低检测线（LOD）为80ng/mL,显色时间在3min左右。结论：成功制备了重金属铜的免疫抗原和检测抗原,获得三株稳定分泌抗Cu2+单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其分泌的单克隆抗体亲和力高,特异性较好。利用制备的抗Cu2+的单克隆抗体初步建立的间接竞争ELISA检测方法和胶体金免疫层析检测方法,均达到国家Ⅲ类水质检测标准（GB/T 14848-93:1000ppb）。为今后推广应用打下基础。

论文目录

• 摘要
• Abstracts
• 前言
• 第一章 重金属
• 1. 几种重金属污染主要的来源与危害
• 2. 重金属的污染来源及现状及污染的特点
• 2.1 水体中重金属的污染来源及现状
• 2.2 土壤中重金属的污染来源及现状
• 2.3 大气中重金属的污染来源及现状
• 2.4 农产品中重金属的污染来源及现状
• 2.5 重金属污染的特点
• 3. 重金属的检测方法
• 3.1 传统重金属检测方法
• 3.2 免疫学检测方法
• 4. 国内外研究现状
• 5. 本研究目的、意义
• 6. 技术路线图
• 第二章 重金属CU单克隆抗体的制备及免疫学检测方法的建立
• 1. 材料与方法
• 1.1 主要仪器和试剂
• 1.2 主要溶液的配制方法
• 2. 实验方法
• 2+单克隆抗体的制备'>2.1 Cu²⁺单克隆抗体的制备
• 2+单克隆抗体的鉴定'>2.2 Cu²⁺单克隆抗体的鉴定
• 2+间接竞争ELISA方法的建立'>2.3. Cu²⁺间接竞争ELISA方法的建立
• 2+胶体金试纸条免疫层析方法的建立'>2.4. Cu²⁺胶体金试纸条免疫层析方法的建立
• 3. 实验结果
• 2+单克隆抗体的制备'>3.1 Cu²⁺单克隆抗体的制备
• 3.2. 单克隆抗体的鉴定
• 4. 重金属Cu竞争ELISA检测方法的初步建立
• 4.1 棋盘滴定选择抗原抗体最佳反应浓度
• 4.2 竞争条件优化
• 4.3 竞争ELISA标准抑制曲线
• 5. 重金属Cu胶体金免疫层析检测方法的初步建立
• 5.3 胶体金试纸条的制备
• 5.4 胶体金试纸条特异性的检测
• 5.5 胶体金试纸条灵敏度的检测
• 6. 讨论
• 6.1 关于铜离子完全抗原的制备
• 6.2 杂交瘤细胞株的筛选
• 6.3 抗体的大量制备与鉴定
• 第三章 结论与展望
• 参考文献
• 在学期间发表论文清单
• 在学期间参加的学术会议
• 在学期间参加的实验室seminar
• 致谢