论文摘要
近视眼是目前全球发生率最高的屈光不正，其发病年龄不断提前，发生率不断增加，且发生后呈进展趋势，已经成为严重的公共卫生问题，世界卫生组织（WHO）已将近视眼的防治列为全球防盲计划之一。自从1977年Wiesel和Raviola首次建立形觉剥夺动物模型以来，人们对近视的发生机制有了一定的认识，即形觉剥夺主要通过局部视网膜机制来调控邻近巩膜的生长，视网膜含有多种神经递质，形觉剥夺可以导致神经递质水平发生改变，参与调控FDM的形成。形觉剥夺性实验动物模型的建立是近视眼的研究中一次重大突破，通过这种研究方法，我们已对实验性近视眼有了初步的认识，为近视眼的理论探讨提供了极有价值的信息和思路。病理性近视眼是常见的致盲眼病，在其发展过程中视网膜感光细胞不断减少，凋亡可能是其感光细胞死亡的机制之一，细胞凋亡是指为维持内环境稳定，由基因控制的细胞自主的有序的死亡。细胞凋亡与细胞坏死不同，细胞凋亡不是一被动的过程，而是一主动过程，它涉及一系列基因的激活、表达以及调控等的作用；它并不是病理条件下，自体损伤的一种现象，而是为更好地适应生存环境而主动争取的一种死亡过程。研究认为细胞凋亡是细胞在各种死亡信号刺激后发生的一系列瀑布式激活的主动性细胞死亡过程。越来越多的实验证实天冬酰胺特异酶切的半胱氨酸蛋白酶（Caspases）在细胞凋亡调节过程中起关键作用。在凋亡的执行阶段，Caspase-3酶原因其Asp-28-ser-29和Asp-175-ser-176两个酶切位点受切割被激活，降解成分子质量为17ku和12ku的两个活性亚单位。活化的Caspase-3特异地切割DNA，使参与DNA损伤修复过程的聚ADP核糖聚合酶，以及DNA依赖的蛋白激酶等失活，促使染色质浓缩和核酸酶激活，导致细胞凋亡。神经生长因子是一种蛋白质，广泛存在于动物体内，不仅能够维持感觉神经元存活和神经纤维生长，还有在个体发育期间增加分枝及保护分化后神经元的特殊功能，能够增加感觉神经肽基因的表达，鉴于此，我们设计了利用形觉剥夺性近视动物模型，运用玻璃体腔注射神经生长因子的方法干预近视形成过程，从而了解神经生长因子对形觉剥夺性近视的作用，为近视的防治提供新的思路。目的通过运用半透明眼罩遮盖豚鼠眼睛以形成形觉剥夺性近视，并在形觉剥夺性近视形成过程中形觉剥夺眼玻璃体内注射神经生长因子进行干预，观察其对形觉剥夺性近视的影响，从而探讨神经生长因子对形觉剥夺性近视的影响，为近视的防治提供新的实验依据。方法50只1周龄健康三色豚鼠随机分为三组，第1组10只，第2组和第3组各20只，每只豚鼠均用半透明眼罩遮盖右眼，各组豚鼠室内分笼饲养，自由饮食，室内日光灯照明，每日照明与黑暗时间均为12小时，第一组实验动物不进行其它干预，右眼遮盖第12周麻醉下微量进样器分别向第2和第3组遮盖眼玻璃体内注射神经生长因子5μg（1μg／μl）和生理盐水5μl，隔日1次，共3次，每组豚鼠在形觉剥夺12周后由同一验光经验丰富的验光师在暗室内带状检影验光，散光按等效球镜计算，验光前一小时用复方托品咔胺点眼散瞳4次。氯胺酮麻醉后做A型超声测量眼球前后径（自角膜顶点到玻璃体与视网膜交界处后极点距离，每眼测量5次，取平均值），水合氯醛过量麻醉致死后立即取出眼球，除去筋膜，固定，包埋，切片后运用SP免疫组化检测视网膜中Caspase-3的表达，运用TUNEL技术检测视网膜凋亡细胞，操作步骤均严格按说明书进行。结果1．三组实验动物形觉剥夺眼与自身对照眼相比视网膜内核层与外核层细胞减少，细胞排列稀疏，由于视网膜神经节细胞单层排列，并且稀疏，所以在光镜下观察差异不明显。第3组实验动物遮盖眼视网膜与第2组比较显示内核层与外核层细胞减少，细胞排列稀疏。2．三组实验动物形觉剥夺眼与自身对照眼相比均形成相对性近视；形觉剥夺眼眼轴均有所延长，第1组形觉剥夺眼眼轴最长，为10.02±1.16mm，第2组形觉剥夺眼眼轴最短，为9.84±1.17mm，第3组形觉剥夺眼眼轴长度为9.86±1.11mm。3．三组实验动物形觉剥夺眼与自身对照眼相比眼轴长度差异均有统计学意义；第2组试验动物的形觉剥夺眼眼轴长度为9.84±1.17mm，与1、3两组形觉剥夺眼眼轴长度相比差异没有统计学意义；1、3两组形觉剥夺眼眼轴长度相比差异没有统计学意义；4．三组实验动物形觉剥夺眼与自身对照眼相比屈光度差异有统计学意义；第2组试验动物的形觉剥夺眼屈光度为-9.25±1.80D，与1、3两组形觉剥夺眼屈光度相比差异没有统计学意义；而1、3两组形觉剥夺眼屈光度相比差异没有统计学意义；5．第2组实验动物的形觉剥夺眼视网膜细胞凋亡率为1.41±0.42（单位％），第3组试验动物的形觉剥夺眼视网膜细胞凋亡率为2.03±0.73（单位％），第1组试验动物的形觉剥夺眼视网膜细胞凋亡率为2.14±0.58（单位％），1、3组与第2组相比差异均有统计学意义；6．另外，我们发现利用吸光光度值测定法反映Caspase-3表达情况显示，第2组试验动物的形觉剥夺眼视网膜细胞中Caspase-3表达最少，与第3组试验动物的形觉剥夺眼视网膜细胞中Caspase-3表达相比差异有统计学意义。视网膜细胞中Caspase-3表达与视网膜细胞凋亡率具有相关性。结论神经生长因子能够抑制豚鼠形觉剥夺性近视视网膜细胞凋亡的发生。半透明眼罩遮盖法建立豚鼠近视动物模型是成功的。