骨髓间充质干细胞复合组织工程化脱细胞真皮基质修复皮肤缺损

论文摘要

皮肤是人体最大的器官,它完整地覆盖于身体表面,起到维护内环境稳定和阻止微生物和化学物质损害的作用。皮肤的大面际缺损是临床上的难治性疾病,人们一直在寻求好的方法来解决这一临床难题。许多因素,例如烧伤、创伤、顽固性皮肤溃疡以及肿瘤切除手术等常常造成大面积皮肤缺损,这些常能导致更严重的疾病甚至死亡。因此,皮肤缺损的治疗是非常重要的。目前临床上常用的治疗方法有自体、异体或异种皮移植,但自体皮来源有限,且存在造成供皮区新的创伤缺陷,异体皮、异种皮移植仍存在一定的免疫排斥反应,且有传播疾病的危险,难以满足临床应用的需要。组织工程学是一新兴学科,它是利用种子细胞和支架材料来构建所需要的组织工程器官。组织工程器官能解决临床上可供移植器官短缺的问题。组织工程皮肤是目前最成熟的组织工程产品,多种类型的组织工程皮肤已经应用于临床,并取得良好的效果。干细胞能够保持自我更新、分化发展成许多类型成熟细胞且能快速增殖。骨髓间充质干细胞属于成体干细胞,它能增殖分化成许多其他类型的细胞。组织工程化脱细胞真皮是一种新型的组织工程支架材料,具有许多优点,例如,它具有良好的三维支架结构且组织相容性非常好。本研究应用组织工程学原理,利用骨髓间充质干细胞和组织工程支架材料来构建组织工程皮肤,用于皮肤缺损的治疗。期望为临床治疗皮肤缺损提供新方法。本研究主要分为四个部分1.骨髓间充质干细胞培养上清液对皮肤成纤维细胞增殖和胶原分泌的影响:首先,我们培养骨髓间充质干细胞并收集其上清液。然后,采用MTT法和羟脯胺酸比色法来检测不同浓度的骨髓间充质干细胞上清液对成纤维细胞增殖和胶原分泌的影响。结果我们发现,骨髓间充质干细胞上清液可以促进成纤维细胞的增殖和胶原的分泌。2.体外构建组织工程化脱细胞真皮基质:首先,在体外培养扩增成纤维细胞。然后把扩增培养的成纤维细胞和胶原按一定比例混合,构建组织工程皮肤。连续培养10天后,我们应用组织工程技术去除组织工程皮肤中的成纤维细胞。我们用扫描电镜和HE染色来观察所构建的组织工程皮肤。结果发现成纤维细胞去除完全,组织工程化脱细胞真皮基质结构良好。3.骨髓间充干细胞复合组织工程化脱细胞真皮基质构建组织工程皮肤:首先,我们应用密度梯度离心法分离纯化鼠的骨髓间充质干细胞。扩增培养后,按照一定密度种植在组织工程化脱细胞真皮表面。在液体培养基中连续培养12天,构建出组织工程皮肤。我们通过扫描电镜和组织学观察发现骨髓间充质干细胞在组织工程化脱细胞真皮基质中生长良好。4.体内观察复合皮肤对动物皮肤创面愈合的影响:首先我们在大鼠背部制作全层皮肤缺损,然后把所构建的复合皮肤、单纯组织工程化脱细胞真皮基质分别移植到创面上,同时设空白对照组,我们在不同的时间点观察创面愈合情况及组织结构变化情况。我们可以看到,在体内组织工程皮肤没有明显的排斥反应,它可以改善皮肤愈合的质量。

论文目录

• 缩略语表
• 中文摘要
• ABSTRACT
• 前言
• 文献回顾
• 正文
• 实验一 骨髓间充质干细胞培养上清液对成纤维细胞增殖及胶原分泌的影响
• 1 材料和方法
• 1.1 材料及试剂
• 1.2 方法与步骤
• 2 结果
• 2.1 骨髓间充质干细胞培养上清液对成纤维细胞增殖的影响
• 2.2 骨髓间充质干细胞培养上清液对成纤维细胞胶原分泌的影响
• 2.3 骨髓间充质干细胞培养上清液对成纤维细胞细胞周期的影响
• 3 讨论
• 实验二 组织工程化脱细胞真皮基质的制备
• 1 材料和方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 2 结果
• 2.1 组织工程化脱细胞真皮基质的形成
• 2.2 组织学结构
• 2.3 机械强度的检测
• 2.4 细胞毒性试验
• 2.5 SD 大鼠皮下移植结果
• 3 讨论
• 实验三 骨髓间充质干细胞复合组织工程化脱细胞真皮基质构建组织工程皮肤
• 1 材料和方法
• 1.1 材料和试剂
• 1.2 方法与步骤
• 2 结果
• 2.1 组织工程化脱细胞真皮基质
• 2.2 骨髓间充质干细胞体外培养
• 2.3 组织工程皮肤的结构
• 3. 讨论
• 实验四 组织工程皮肤修复大鼠皮肤创面的实验研究
• 1 材料和方法
• 1.1 实验动物
• 1.2 材料
• 1.3 方法与步骤
• 2 结果
• 2.1 实验动物数量分析
• 2.2 倒置显微镜下观察骨髓间充质干细胞的生长情况
• 2.3 荧光显微镜下观察PKH26 标记过的BMSCs
• 2.4 大体观察各组创面愈合情况
• 2.5 荧光显微镜下观察BMSCs在体内的存活情况
• 2.6 组织学观察
• 3 讨论
• 小结
• 参考文献
• 附图
• 个人简历和研究成果
• 致谢