幽门螺杆菌对胃癌SGC-7901细胞增殖和凋亡影响的研究

论文摘要

目的：通过对Bcl-2、Bad蛋白表达的检测,研究幽门螺杆菌（Helicobacter pylori,Hp）对体外培养人胃癌细胞株SGC-7901增殖与凋亡的影响,进一步了解Hp的致病机制,为Hp相关疾病的诊治及预后提供新思路。方法：Hp培养,不同浓度（104、105、106、107cfu/ml） Hp悉尼菌株SS1与人胃腺癌细胞SGC-7901共同孵育,分别于12、24、48小时用MTT方法分析Hp对胃癌细胞增殖的影响,光学显微镜下观察细胞形态的变化,依据MTT结果选取不同时间点,用细胞爬片免疫组化方法检测Bcl-2、Bad蛋白的表达。结果：1、Hp培养、冻存（1）Hp菌落形态划线接种的Hp培养菌落呈半透明针尖样,直径1-2mm,传代接种菌量较大时,菌落在培养基表面融合成一层半透明的菌苔。（2）Hp涂片镜下观察,典型的Hp呈革蓝染色阴性,弧形、S状弯曲或短杆状菌,随培养时间延长（大于5天）可见Hp球形状变异体。（3）Hp生化鉴定典型弯曲状Hp快速尿素酶试验（RUT）、氧化酶试验及触酶试验阳性,球形变Hp生化试验表现为弱阳性。（4）冻存方法短时间内Hp冻存直接用生理盐水效果较好,但不可反复冻融。2、细胞形态学观察倒置显微镜下观察未加Hp组的SGC-7901细胞紧贴板底生长,呈梭形或多角形,透明度大,折光性强,细胞内可见部分微结构；与Hp共同培养12h左右可观察到胃癌细胞收缩,体积变小,胞质浓缩,有脱壁现象；随时间延长,贴壁细胞内出现较多中毒颗粒,细胞质内可见空泡样变,107cfu/ml组尤为明显；48h以后高浓度组（106、107cfu/ml）可见部分细胞崩解,形成碎片,可见崩解后残留颗粒或菌体。3、MTT检测结果各组细胞培养随时间的延长MTT比色OD值均升高；SGC-7901细胞与低浓度Hp （104、105cfu/ml）共同培养12h及24h的OD值与对照组差别无统计学意义（P>0.05）,共同培养48h时OD值显著高于对照组（P<0.01）; SGC-7901细胞与高浓度Hp （106、107cfu/ml）共同培养,12h时107cfu/ml组的OD值显著低于对照组（P<0.05）；在24h,106、107cfu/ml组OD值均显著低于对照组,差别有统计学意义（P<0.01）,共培养48h时106、107cfu/ml组OD值显著低于对照组（P<0.01）。4、细胞免疫组化结果MTT结果示,Hp与胃癌细胞共培养24h及48h有相同作用,且48h作用较强,所以免疫组化我们选用了12h、48h两个时间点。（1）Bcl-2蛋白的表达Bcl-2蛋白的棕黄色颗粒分布于细胞浆中。在HP与胃癌细胞作用12h时,各组细胞中Bcl-2蛋白阳性表达率与对照组相比差异无统计学意义（P>0.05）；在共同作用48h时,各组Bcl-2蛋白阳性表达率与对照组相比均有显著性差异（P<0.01）,表现为低浓度Hp （104、105cfu/ml）促进Bcl-2蛋白的表达,高浓度Hp（106、107cfu/ml）抑制Bcl-2蛋白的表达。（2）Bad蛋白的表达Bad蛋白的棕黄色颗粒分布于细胞浆中。在HP与胃癌细胞作用12h时,104、105、106cfu/ml组Bad阳性表达率与对照组相比差异无统计学意义（P>0.05）；而107组Bad蛋白阳性表达率明显高于对照组（P<0.05）,说明细胞凋亡有所增加。在作用48h,各组Bad蛋白阳性表达率与对照组相比均有显著性差异（P<0.01）,表现为低浓度Hp （104、105cfu/ml）组Bad蛋白阳性表达率明显低于对照组,高浓度Hp （106、107cfu/ml）组Bad蛋白阳性表达率明显高于对照组。结论：1、用生理盐水冻存Hp的短期保存效果较好。Hp的球形体生化反应呈弱阳性,可能具备致病性。2、成功应用Hp标准菌株悉尼株SS1体外感染人胃腺癌细胞株SGC-7901,避开了体内机体炎症反应及免疫反应时各类炎性介质、细胞因子的作用因素,对Hp致病机制的研究有较大的价值；SGC-7901细胞为人中分化胃腺癌细胞,具有易培养、生长快及易于传代等优点,使实验的可重复性提高。3、不同浓度Hp对胃癌细胞增殖和凋亡的影响不同,其机理可能与凋亡相关蛋白Bcl-2、Bad的不同表达有关。（1）低浓度Hp可促进胃癌细胞增殖,上调抗凋亡基因蛋白Bcl-2的表达,并随作用时间延长作用越明显,同时Bad表达减少,即促进增殖的同时还表现为细胞凋亡的抑制；（2）高浓度Hp可以引起胃癌细胞空泡变性,抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,下调抗凋亡基因蛋白Bcl-2表达,上调促凋亡基因蛋白Bad表达,说明抑制细胞增殖的同时伴有细胞凋亡的增加,且Hp浓度较高时短时间内这种作用即可出现,并随时间延长作用越明显。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 缩略语/符号说明
• 前言
• 研究现状、成果
• 研究目的、方法
• 流程图
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 在学期间发表论文
• 综述 Hp感染胃上皮细胞增殖凋亡与Bcl-2家族调控
• 综述参考文献
• 致谢