天然酯型儿茶素EGCG的分离纯化及药学研究

论文摘要

本文建立了等梯度高效液相色谱（HPLC）法定性、定量分析儿茶素,并对儿茶素中主要成分EGCG含量测定方法进行方法学考察。最佳色谱条件为:ODS （5μm,4.6×250 mm）柱,乙腈∶乙酸乙酯∶水（0.05% H3PO4）=86∶12∶2（V/V）为流动相（pH=3.0）,流速:0.8 ml/min,紫外检测波长:280 nm。此分析方法简便易行,准确可靠。文中以茶多酚粗品为原料,进行提取富集得到酯型儿茶素（EGCG,GCG,ECG）并将其作为色谱分离纯化样品。采用单因素试验考察了EGCG在分配色谱柱上的分离及纯化条件。确定最佳分离纯化条件:柱床高度为40 cm,流速为5 ml/min,每4 min收集一个馏分,基本实现了儿茶素单体EGCG的有效分离。本实验方法简便,成本低廉,产品纯度均较高,并可实现EGCG一次性克量级以上的制备。工艺放大中,以含EGCG≥60%的茶多酚粗品为原料,在实验室小试的基础上,采用均匀放大的方法,最终实现了EGCG的成功分离纯化。分离纯化条件为:分别以蒸馏水为固定相,乙醚为移动相,洗脱流速为10 ml/min;径高比1∶1 0;每隔30 min收集一个洗脱液。另外,初步探讨了酯型儿茶素的稳定性。本研究经过一次柱层析,即可得到高纯的EGCG,所采用的分离设备经济,方法简便,易于工业化。药学部分重点研究了EGCG的处方和冻干工艺。以外观、含水量和复溶性为指标,经处方筛选和工艺优化后,以25 mg EGCG,200 mg乳糖为赋形剂,规格为2 ml/支,于-40.0℃预冻5 h,-25.0℃升华干燥32 h,再升温0℃解析干燥5 h。对制得的注射用EGCG进行质量研究,内容包括:一般检查项目（澄明度、pH值、水分）、含量测定研究。室温留样3个月和加速试验3个月的初步稳定性考察表明本品稳定。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 第1章 绪论
• 1.1 茶多酚概述
• 1.2 儿茶素结构及性质
• 1.2.1 儿茶素分子结构
• 1.2.2 儿茶素组成
• 1.2.3 儿茶素理化性质
• 1.3 酯型儿茶素单体EGCG 分离纯化研究
• 1.3.1 柱色谱法（CC）
• 1.3.2 高效液相制备色谱法（HPLC）
• 1.3.3 逆流色谱法（HSCCC）
• 1.4 酯型儿茶素单体EGCG 生物活性
• 1.4.1 酯型儿茶素单体EGCG 抗肿瘤活性研究
• 1.4.2 酯型儿茶素单体EGCG 的逆转肿瘤多药耐药性活性研究
• 1.5 酯型儿茶素单体EGCG 的市场前景
• 第2章 酯型儿茶素分析方法的建立
• 2.1 仪器与试剂
• 2.1.1 仪器
• 2.1.2 试剂
• 2.2 HPLC 法定性分析儿茶素的研究
• 2.2.1 流动相组分对分离度的影响
• 2.2.2 流动相中乙酸乙酯对分离度的影响
• 2.2.3 流动相中酸对分离度的影响
• 2.3 HPLC 法定量分析酯型儿茶素EGCG 的研究
• 2.3.1 最大吸收波长的测定
• 2.3.2 标准曲线的制备
• 2.3.3 精密度及检测限的测定
• 2.3.4 加样回收率
• 2.3.5 重现性试验
• 2.3.6 稳定性试验
• 2.4 结果与讨论
• 第3章 天然酯型儿茶素EGCG 分离纯化研究
• 3.1 仪器与试药
• 3.1.1 仪器
• 3.1.2 试药
• 3.2 酯型儿茶素的提取与富集
• 3.2.1 盐析技术精制茶多酚的研究
• 3.2.2 溶剂萃取技术提取酯型儿茶素的研究
• 3.3 酯型儿茶素单体EGCG 分离纯化条件研究
• 3.3.1 酯型儿茶素单体EGCG 预实验
• 3.3.2 HPLC 检测条件
• 3.3.3 分离纯化影响因素考察
• 3.4 结果与讨论
• 第4章 天然酯型儿茶素EGCG 分离纯化工艺放大研究
• 4.1 仪器与试剂
• 4.1.1 仪器
• 4.1.2 试剂
• 4.2 EGCG 分离纯化工艺放大
• 4.2.1 安装硅胶层析柱
• 4.2.2 样品前处理
• 4.2.3 分离纯化EGCG
• 4.2.4 层析柱后处理
• 4.3 天然酯型儿茶素单体EGCG 的稳定性研究
• 4.3.1 pH 对酯型儿茶素单体EGCG 溶液稳定性影响
• 4.3.2 乙醚对酯型儿茶素单体EGCG 溶液稳定性考察
• 4.3.3 温度对不同酯型儿茶素单体EGCG 溶液稳定性的影响
• 4.4 酯型儿茶素EGCG 成品的氧化性
• 4.4.1 温度对酯型儿茶素EGCG 固体的影响
• 4.4.2 温度对酯型儿茶素EGCG 溶液的影响
• 4.5 结果与讨论
• 第5章 注射用EGCG 制备及质量研究
• 5.1 仪器与试药
• 5.1.1 仪器
• 5.1.2 试药
• 5.2 注射用EGCG 处方研究
• 5.2.1 注射用EGCG 处方设计
• 5.2.2 EGCG 冻干溶液的配制
• 5.2.3 赋形剂考察
• 5.2.4 除菌方法
• 5.2.5 处方
• 5.3 注射用EGCG 制备工艺研究
• 5.3.1 注射用EGCG 制备工艺拟定
• 5.3.2 放大实验
• 5.4 注射用EGCG 质量考察
• 5.4.1 性状
• 5.4.2 鉴别
• 5.4.3 检查
• 5.4.4 含量测定
• 5.5 注射用EGCG 稳定性研究
• 5.5.1 注射用EGCG 稳定性试验
• 5.5.2 加速试验
• 5.5.3 长期试验
• 5.6 注射用EGCG 生物安全性试验
• 5.6.1 溶血性试验
• 5.6.2 过敏性试验
• 5.6.3 血管刺激性试验
• 5.7 结果与讨论
• 结论
• 参考文献
• 致谢