脂多糖致小鼠肝损伤时对脂代谢基因转录水平的影响

论文摘要

为了研究脂多糖（LPS）致肝损伤对脂代谢基因转录水平的影响，本试验以昆明小鼠为研究对象，经腹腔给小鼠注射LPS，从形态学、肝功指标和炎性信号分子转录水平角度，判定肝损伤模型的建立，利用荧光定量PCR方法检测小鼠肝脏、脂肪和肌肉组织脂代谢基因的转录水平，阐明LPS对机体脂代谢基因转录水平的影响。结果如下：小鼠肝损伤模型的建立：随着LPS剂量的增加和作用时间的延长，肝脏组织病理变化明显，由仅有部分细胞核溶解，肝窦轻度充血、少数肝细胞浊肿，少量炎性细胞浸润，直至肝窦扩张，明显充血、淤血，大量炎性细胞浸润，肝细胞呈现点状、小片状坏死；LPS能使血液和肝脏中肝功能指标（GOP和GOT）的活性升高，上调肝脏炎性信号分子转录水平。提示成功建立了LPS诱导的肝脏损伤模型，LPS的使用剂量为3mg/kg，作用时间为6-9h。肝脏中脂代谢关键基因转录水平：时间效应试验中，LPS可显著下调SREBP、ACC mRNA的转录水平，随作用时间的延长而显著下调；12-24h可显著下调CD36、SCD mRNA的转录水平，3-6h显著下调PPARα mRNA的转录水平，6-9h显著上调了LXRβ mRNA的转录水平，对LXRα和FAS mRNA的转录水平影响不大；剂量效应试验中，LPS可显著下调PPARα、LXRα、SREBP、ACC mRNA的转录水平，对LXRβ、CD36、FAS、SCD mRNA转录水平影响不大。提示LPS通过下调核转录因子PPARα、LXRα、SREBP mRNA的转录，降低ACC mRNA的转录水平，使肝脏合成脂肪酸的能力下降。脂肪组织中脂代谢关键基因转录水平：时间效应试验中，LPS能下调脂肪组织中PPARα、SREBP、FAS、ACC mRNA的转录水平，对LXRα、CD36mRNA的转录影响不大，但能上调白色脂肪中LXRβ mRNA的转录，下调褐色脂肪中SCD mRNA的转录，对白色脂肪中SCDmRNA和褐色脂肪中LXRβ mRNA的转录影响不大；剂量效应试验中，LPS下调脂肪组织中LXRα、SREBP mRNA的转录水平，对LXRβ、FAS、ACC mRNA的转录影响不大，能下调白色脂肪中CD36、SCD、ACC mRNA的转录水平，下调褐色脂肪中PPARα mRNA的转录，对褐色脂肪中ACC、SCD、CD36mRNA和白色脂肪中PPARα mRNA的转录影响不大，且调节幅度不依赖于LPS作用时间和剂量。肌肉组织中脂代谢关键基因转录水平：时间效应试验中，LPS可上调SCD、PPARα、LXRα、LXRβ、FAS、ACC、CD36mRNA的转录水平，对SREBP mRNA的转录影响不大；剂量效应试验中，LPS上调PPARα、SCD、FAS、ACC mRNA的转录水平，下调LXRα、LXRβ、CD36mRNA的转录，对SREBP mRNA的转录影响不大，调节幅度不依赖于LPS作用时间和剂量。综合以上结果，LPS通过上调炎性信号分子的转录水平诱导小鼠肝脏损伤，损伤程度依赖于LPS的剂量和作用时间；LPS通过下调PPARα、LXRα、SREBP mRNA的转录，进而下调其靶基因转录水平，降低机体合成和转运脂肪酸的能力，降低的幅度具有组织特异性。

论文目录

• 致谢
• 摘要
• 1 文献综述
• 1.1 LPS 诱导肝脏损伤的研究
• 1.2 脂代谢基因的研究
• 1.2.1 脂代谢
• 1.2.2 脂代谢基因
• 1.3 感染和炎症对脂代谢的影响
• 1.3.1 感染对脂代谢相关的核受体及核转录因子的影响
• 1.3.2 炎症因子对脂代谢的影响
• 1.3.3 NF-ΚB 与脂代谢
• 1.4 展望
• 2 引言
• 3 材料与方法
• 3.1 LPS 诱导肝损伤的时间和剂量效应试验
• 3.1.1 试验动物及分组
• 3.1.2 样品采集
• 3.1.3 指标测定
• 3.1.4 试剂溶液配制
• 3.1.5 主要器材
• 3.1.6 试验方法
• 3.1.7 数据统计分析
• 3.2 LPS 对肝脏脂代谢基因转录水平的影响
• 3.2.1 试验动物及分组
• 3.2.2 样品采集
• 3.2.3 指标测定
• 3.2.4 试剂及溶液配制
• 3.2.5 主要仪器
• 3.2.6 试验方法
• 3.2.7 数据统计分析
• 3.3 LPS 对脂肪和肌肉组织中脂代谢基因转录水平的影响
• 3.3.1 试验动物及分组
• 3.3.2 样品采集
• 3.3.3 指标测定
• 3.3.4 试剂剂溶液配制
• 3.3.5 主要仪器
• 3.3.6 试验方法
• 3.3.7 数据统计分析
• 4 结果
• 4.1 LPS 诱导肝损伤的时间和剂量效应试验
• 4.1.1 肝脏病理变化结果
• 4.1.2 血液和肝脏中 GOT 和 GPT 的含量变化结果
• 4.1.3 样品中总 RNA 的检测结果
• 4.1.4 TLR4/NF-ΚB 信号通路关键分子转录水平
• 4.1.5 TLR4/NF-ΚB 信号通路下游靶分子转录水平
• 4.2 LPS 对肝脏脂代谢关键基因转录的影响
• 4.3 LPS 对肝外组织中脂代谢关键基因转录的影响
• 4.3.1 LPS 对白色脂肪组织中脂代谢运关键基因转录的影响
• 4.3.2 LPS 对褐色脂肪组织中脂代谢关键基因转录的影响
• 4.3.3 LPS 对肌肉中脂代谢关键基因转录的影响
• 5 讨论
• 5.1 LPS 诱导肝损伤
• 5.2 肝脏 TLR4/NF-ΚB 信号通路相关基因的转录
• 5.3 LPS 对肝脏脂代谢基因转录水平的影响
• 5.4 LPS 对肝外组织中脂代谢基因转录水平的影响
• 6 结论
• 参考文献
• ABSTRACT