人参土传真菌病害的生物防治

论文摘要

利用枯草芽孢杆菌防治人参土传病害是一种高效、安全的植保新途径,本研究筛选到两株对人参立枯丝核菌（Rhizoctonia solani）、尖镰孢菌（Fusarium oxysporum）等多种病原菌有较强的抑菌效果并且抑菌谱较广的生防菌株。对其形态学、生理生化和分子生物学鉴定的基础上,对两菌株的发酵培养基、最佳发酵条件、20L罐发酵、抗菌粗提物进行了研究。人参病原菌的分离与鉴定。从人参染病的根部、茎部、叶部组织中分离纯化两株病原菌。经初步鉴定dg1菌株为立枯丝核菌（Rhizoctonia solani）和c16菌株为尖镰孢菌（Fusarium oxysporum）。拮抗菌的分离、纯化与鉴定。从人参根际土壤、未栽新土和人参组织中分离纯化出32株对人参立枯丝核菌（R. solani）、人参尖镰孢菌（F. oxysporum）和人参腐皮镰孢菌（F. solani）具有拮抗作用的细菌菌株。通过复筛,拮抗细菌B59和X1菌株对dg1、c16等真菌抑菌率的平均值达到90%以上,表明细菌B59和X1不仅抑菌谱广,而且抑菌作用明显,是两株具有高效抑菌活性的菌株,因此对细菌B59和X1进行菌株鉴定、发酵研究和抗菌物质分析。对B59菌株、X1菌株的形态特征、培养性状、生理生化特征和16Sr DNA分子生物学鉴定,结果显示为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）。通过正交试验对B59菌株和X1菌株的培养基成分进行优化,并通过单因素试验对两菌株的最适培养条件进行了研究。B59菌株培养基成分和最适培养条件为：葡萄糖15g/L,牛肉膏5.0 g/L, NaH2PO4+Na2HPO4 5g/L, pH8,250mL三角瓶中装入25mL培养基,接种量为1.5%,30℃,160 r/min培养。X1菌株的最佳培养基成分和培养条件为：葡萄糖15g/L,牛肉膏+酵母膏（1：1） 5.0g/L,NaH2PO4+Na2HPO4 5.0 g/L, pH8,250mL三角瓶中装入25mL培养基,接种量为1%,25℃,160 r/min培养。优化后培养的枯草芽孢杆菌X1和B59菌株对人参腐皮镰刀菌（Fusarium solani）抑菌能力显著提高。利用优化后的培养基和培养条件对B59和X1菌株进行了20L罐发酵,培养24h后,枯草芽孢杆菌B59菌剂的活芽孢数为2.6×109cfu/mL;枯草芽孢杆菌X1菌剂的活芽孢数为2.3×109cfu/mL。B59和X1的发酵液和抗菌粗提物对供试病原菌均有较强的抑制作用,说明B59和X1菌株在代谢过程中分泌了具有拮抗作用的蛋白或多肽类物质。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 第1章 前言
• 1.1 人参概述
• 1.2 人参主要的真菌病害及病原菌
• 1.2.1 人参锈腐病
• 1.2.2 人参根腐病
• 1.2.3 人参立枯病
• 1.2.4 人参菌核病
• 1.2.5 人参枯萎病
• 1.3 人参病害的防治
• 1.3.1 人参病害的化学防治
• 1.3.2 人参病害的农业防治
• 1.3.3 人参病害的生物防治
• 1.4 人参土传病害生物防治的研究现状
• 1.4.1 应用生防真菌防治人参土传病害
• 1.4.2 应用生防细菌防治人参土传病害
• 1.4.3 应用放线菌防治人参土传病害
• 1.4.4 利用微生物混合制剂防治人参土传病害
• 1.5 存在问题
• 1.6 发展前景
• 1.7 本研究的目的与意义
• 1.8 课题来源和主要研究内容
• 1.8.1 课题来源
• 1.8.2 主要研究内容
• 第2章 材料与方法
• 2.1 试验材料
• 2.1.1 供试植株与土壤样品
• 2.1.2 培养基
• 2.1.3 主要试剂及常用试剂配方
• 2.1.4 主要仪器和设备
• 2.2 试验方法
• 2.2.1 人参病原菌的分离与鉴定
• 2.2.2 土壤细菌和人参根部内生细菌的分离
• 2.2.3 拮抗菌株的筛选、抑菌能力及抗菌谱分析
• 2.2.4 拮抗菌X1和B59的菌种鉴定
• 2.2.5 枯草芽孢杆菌X1和B59菌株发酵条件的研究
• 2.2.6 枯草芽孢杆菌X1和B59菌株20L罐发酵研究
• 2.2.7 抗菌物质的初步研究
• 第3章 结果与分析
• 3.1 人参病原菌的分离与鉴定
• 3.1.1 人参病原菌的分离
• 3.1.2 病原菌的回接
• 3.1.3 病原菌性状及形态学鉴定
• 3.2 土壤细菌和人参根部内生细菌的分离
• 3.2.1 土壤细菌的分离
• 3.2.2 人参内生细菌的分离
• 3.3 拮抗菌株的筛选及抗菌谱分析
• 3.3.1 拮抗菌株的初筛
• 3.3.2 拮抗菌株的复筛及抑菌率计算
• 3.4 拮抗菌X1和B59的菌种鉴定
• 3.4.1 形态特点和生理生化特性
• 3.4.2 拮抗菌X1和B59的分子生物学（16S rDNA）鉴定
• 3.5 枯草芽孢杆菌X1和B59菌株发酵条件的研究
• 3.5.1 菌量与吸光度相关性的测定
• 3.5.2 培养基优化
• 3.5.3 枯草芽孢杆菌X1和B59菌株生长曲线的测定
• 3.5.4 枯草芽孢杆菌X1和B59菌株培养基初始pH值的确定
• 3.5.5 枯草芽孢杆菌X1和B59菌株需氧量的确定
• 3.5.6 枯草芽孢杆菌B59和X1菌株接种量的确定
• 3.5.7 枯草芽孢杆菌B59和X1菌株培养温度的确定
• 3.5.8 枯草芽孢杆菌X1和B59菌株摇床转速的确定
• 3.5.9 培养基优化结果
• 3.6 枯草芽孢杆菌X1和B59菌株20L罐发酵研究
• 3.7 抗菌物质的初步研究
• 第4章 结论
• 第5章 讨论
• 参考文献
• 致谢
• 攻读学位期间发表论文