论文摘要
目的：采用单侧输尿管结扎(UUO)诱导肾间质纤维化大鼠模型，观察细胞外基质成分纤维连接蛋白(Fibronectin，FN)在肾小管损伤及间质纤维化过程中的表达以及中药扶正活血化瘀法在肾小管损伤及间质纤维化过程中的肾保护作用及可能的作用机制。方法：雄性Wistar大鼠30只，随机分为3组：假手术组(Sham group)、模型组(UUO group)、中药治疗组(A group)；假手术组、模型组于术前3天开始每天2ml蒸馏水灌胃给药；中药治疗组于术前3天开始每天2ml中药灌胃给药；术后21天处死各组大鼠，收集血清测定尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)水平；术侧肾组织10％中性甲醛溶液固定，石蜡包埋切片，以3μm的石蜡切片，常规行HE、Masson染色，Masson染色后进行图像分析以对肾间质纤维化程度进行半定量分析，免疫组化半定量检测各组大鼠肾组织中FN的蛋白表达。结果：1、肾功能结果：模型组尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)水平均较假手术组显著增加，两组间比较有显著性差异(P＜0.05，P＜0.05)；治疗组较模型组呈下降趋势，两组间比较有显著性差异(P＜0.05，P＜0.05)。2、肉眼观察结果：假手术组肾脏大小形态正常，颜色暗红；模型组结扎侧肾脏肿大，颜色变浅，有囊性感，内含混浊尿液，肾实质变薄。肾组织行HE染色结果显示：假手术组。肾脏组织结构正常，肾小管排列紧密、整齐，小管基底膜光滑连续，偶见灶性炎细胞浸润；模型组可见弥漫的肾小管上皮细胞空泡变性、扩张、部分萎缩，偶见坏死，肾间质增宽，大量的炎细胞浸润和间质纤维化，肾小球病理改变不明显。治疗组上述改变均有所减轻。肾组织行Masson染色结果显示：假手术组。肾脏的胶原染色主要位于肾小球基膜、Bowman囊、系膜区和肾小管的毛细血管周围，而肾小管周围间质部分则比较狭窄；模型组可见肾间质增宽、有大量胶原纤维增生，肾小球病变不明显；治疗组上述改变均有所减轻。肾间质纤维化图像分析结果显示：肾间质胶原染色面积模型组较假手术组明显增高，两组间比较有显著性差异(P＜0.05)，治疗组较模型组显著下降，两组间比较有显著性差异(P＜0.05)。3、肾组织免疫组织化学：纤维连接蛋白(FN)的蛋白表达分布：假手术组大鼠肾间质有少量表达，染色为颗粒状，着色稀疏；模型组表达明显增多，呈不均匀颗粒状，肾小球表达不明显；治疗组表达较模型组明显降低。图像分析结果显示模型组纤维连接蛋白(FN)免疫组化阳性染色面积和积分光密度均较假手术组明显上调，两组间比较有显著性差异(P＜0.05，P＜0.05)；治疗组表达均较模型组降低，两组间比较有显著性差异(P＜0.05，P＜0.05)。4、相关性分析：纤维连接蛋白(FN)与肾间质纤维化面积均呈显著正相关。肾间质纤维化面积分别与BUN、Scr均呈正相关。结论：1、细胞外基质成分纤维连接蛋白(FN)在单侧输尿管结扎(UUO)致肾小管损伤及间质纤维化过程中在肾组织中表达显著增高；2、扶正活血化瘀法组方中药能降低单侧输尿管结扎(UUO)大鼠血尿素氮、血肌酐水平，改善肾功能；3、扶正活血化瘀法组方中药可以抑制细胞外基质成分纤维连接蛋白(FN)在肾间质的沉积，减少实验大鼠肾间质纤维化面积，推测其抑制细胞外基质成分纤维连接蛋白(FN)过度表达的作用可能是其防治肾小管损伤及间质纤维化的作用机制之一。