Notch信号途径转录因子RBP-J在小鼠心脏移植急性排斥反应中对受体T细胞亚群的影响

论文摘要

目的:1.建立易行可靠的小鼠颈部异位心脏移植模型,改进小鼠颈部异位心脏移植模型和手术方式。2.培育鉴定T细胞中特异性剔除RBP-J转基因小鼠,通过建立小鼠颈部异位心脏移植模型,探讨Notch信号途径中转录因子RBP-J对小鼠同种异体心脏移植受体T细胞亚群的影响方法:1.在显微镜下对受体手术,游离受体右侧静外静脉和颈总动脉,对供体,经下腔静脉注射肝素钠全身肝素化后,于低温下切取供心;采用供心无名动脉与受体颈总动脉端端间断吻合,供心肺动脉与受体颈外静脉端端吻合,进行小鼠颈部异位心脏移植。2.交配Lck-Cre x RBP-Jflox/+杂合子转基因小鼠,提取其子代小鼠尾巴DNA,通过凝胶电泳,鉴定小鼠基因型,确定基因敲除小鼠。3.选用三种小鼠,即C57BL/6,Balb/c以及RBP-J基因条件性剔除小鼠,采用颈部异位小鼠心脏移植模型,将32只小鼠按随机原则分为2组:A组（n=8）BALB/c→C57BL/6;B组（n=8）BALB/c→RBP-J基因剔除小鼠,移植术后1、3、5、7天留取移植物,观察大体情况及组织病理学变化。4.提取小鼠外周血,行血常规检查。获取受体小鼠胸腺、淋巴结、脾脏,分离T淋巴细胞,抗-CD4-PE、抗-CD8-APC和抗-CD25-FITC染色,行流式细胞仪检测。结果:1.供心总缺血时间40 min,术后复跳率90%,改进后的术式手术成功率有所提高,模型的建立为下一步实验提供了技术基础。2.通过培育繁殖,我们得到转基因小鼠并通过DNA PCR扩增,凝胶电泳鉴定转基因小鼠,为下一步实验提供实验材料。3.建立小鼠颈部异位心脏移植术后, C57小鼠对照组（n=7）移植术后移植心平均存活时间为（6±1.21）d,基因敲除小鼠实验组移植术后移植心平均存活时间为（4±1.8）d,与对照组相比,存活时间明显缩短,（P<0.05）。脾脏细胞的增加主要是Mac1阳性的细胞的绝对数量的增加（P<0.01）,以及CD8阳性细胞的增加（P<0.01）。而淋巴结的细胞数的增加主要是T细胞（P<0.01）,尤其是CD8阳性的T细胞的增加（P<0.01）,以上结果初步提示RBP-J KO受体小鼠相比control受体小鼠,CD8阳性的T细胞对于移植物的反应增强。而脾脏中天然发生的调节性T细胞的绝对数也有所降低（P<0.01）。结论:1.改进后的术式手术成功率高,术中暴露充分、血管处理简单、手术创伤小,污染机率小等,是简单、实用、可靠的手术方式。2.我们培育并鉴定出T细胞中特异性剔除RBP-J转录因子的转基因小鼠,从而为进一步研究转录因子RBP-J在小鼠心脏移植急性排斥反应中对受体T细胞亚群的影响奠定了基础。3.通过建立小鼠颈部异位心脏移植,我们发现基因敲除小鼠的免疫排斥反应有所加强,反应性T细胞增殖加强,调节性T细胞增殖有所减弱,这为研究移植免疫提供新思路。

论文目录

• 缩略语表
• 中文摘要
• ABSTRACT
• 前言
• 文献回顾
• 正文
• 实验一 小鼠颈部异位心脏移植模型建立的改进
• 前言
• 1 材料
• 2 方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 实验二 Notch信号途径转录因子RBP-J在小鼠心脏移植急性排斥反应中对受体T细胞亚群的影响
• 前言
• 1 材料
• 2 方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 小结
• 参考文献
• 附录
• 个人简历和研究成果
• 致谢