论文摘要
肺癌是目前全球发病率和死亡率较高的恶性肿瘤之一，作为威胁全世界人类健康的重大疾病，其死亡人数约占整个癌症死亡人数的17.6％，五年生存率仅为8.9％～15％。由于肺癌一般发病隐匿，早期症状不明显易被忽视，大部分肿瘤患者在初次诊断为肺癌时，就已经发生了肿瘤的转移。肿瘤侵袭和转移是肺癌的恶性标志，也是导致患者治疗失败和死亡的主要原因。肺鳞癌作为肺癌发病的常见类型，约占全部肺癌的30％～50％，其转移是多基因、多因子共同作用的结果，虽然从基因和转录水平已对其已进行了许多成功的研究，但其转移机制仍不十分明确。由于基因只是遗传信息的携带者，蛋白质才是生命活动的真正执行者，若直接从蛋白质入手来进行研究将更全面、真实地揭示其转移的本质，为肺癌转移机制的研究开辟新的思路、提供新的线索。为了获取纯粹的癌细胞，本研究使用激光捕获显微切割技术（laser capture microdissection，LCM）纯化肺鳞癌原发灶组织和淋巴结转移灶组织，应用双向凝胶电泳技术建立了重复性和分辨率均较好的肺鳞癌原发灶组织和淋巴结转移灶组织的总蛋白质的双向凝胶电泳图谱。应用PDQuest软件对双向电泳图谱中的差异表达量2倍以上的蛋白进行比较分析，并联合采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）和电喷雾串联质谱（ESI-Q-TOF-MS）对差异表达的蛋白质进行分析，获取MALDI-TOF-MS肽质量指纹图谱及ESI-Q-TOF肽序列标签，数据库搜索鉴定了22种差异表达的非冗余蛋白质。为了验证比较蛋白质组学研究结果，采用Western blot及免疫组化技术对两个差异表达蛋白质Rho-GDI alpha和stratifin在肺鳞癌和淋巴结转移癌中的表达水平进行了检测，结果显示Rho-GDIalpha在淋巴结转移癌中表达较高，stratifin在肺鳞癌原发灶中表达较高，与比较蛋白质组学研究的结果一致。本研究采用LCM与双向凝胶电泳及质谱技术相结合的方法，通过对肺鳞癌原发灶组织和淋巴结转移灶组织的蛋白表达谱进行比较，成功鉴定了22个与肺鳞癌转移相关的蛋白质。大部分侯选蛋白通过调控肿瘤细胞的生长、迁移、运动、粘附、凋亡及代谢等途径影响肿瘤细胞的侵袭和转移。研究结果为肺癌转移机制研究奠定基础，同时也为临床预测肺癌转移复发、评估病人预后以及药物治疗耙标提供理论依据。