三七中三醇类皂苷的生物转化

论文摘要

本文主要研究了三七中三醇类皂苷的生物转化。首先采用甲醇浸提法提取三七总皂苷,然后探索了制备三七总皂苷中的主要皂苷单体的方法。又进一步研究了酶转化三七皂苷R1和人参皂苷Re制备人参皂苷Rg1的反应,最后对稀有皂苷R&2、Rg4和Rg6进行制备分离。分别以4kg三七须与三七根为原料,采用甲醇浸提法提取其中的三七总皂苷;结果从三七根中得到总皂苷338.50 g,得率为8.46%,从三七须中得到总皂苷66.50 g,得率为1.66%。提取得到的三七总皂苷经高效液相色谱法（HPLC）检测,表明三七须根与三七主根中总皂苷成分相似,主要皂苷均为Rg1、Rb1、R1、Rd、Re。采用硅胶柱层析法制备三七总皂苷中主要皂苷单体时,只能将Rg1和Rb1分离出来,不能将Rd、Re、R1三种主要皂苷分开;采用大孔吸附树脂—硅胶柱层析法制备三七总皂苷中主要皂苷单体时,可将三七中主要皂苷单体Rg1、Rb1、R1、Rd、Re均分离出来。在酶转化实验中,先从不同菌种和添加了不同诱导物培养基中,筛选出转化底物Re和底物R1生成产物Rg1的最适酶生产菌及该菌培养基;再大量培养转化酶生产菌,提取粗酶液进行转化反应。经试验确定,转化Re与R1混合皂苷制备Rg1的最适酶反应条件为:底物浓度2.0%、底物pH6.0、反应温度37℃、反应时间48 h;转化原人参三醇类皂苷（PPT）生成Rg1的酶反应在反应釜中的最适反应条件为:pH6.0,37℃,90r/min,底物浓度20.0%,反应时间48 h。酶反应产物经AB-8大孔吸附树脂柱用不同浓度乙醇梯度洗脱,可实现对主要酶解产物Rg1的粗分。最后,将较纯净的人参皂苷Re转化为Rg2、Rg4、Rg6,并对产物R2、Rg4、Rg6进行分离。实验结果表明,采用结晶—硅胶柱层析法分离酸解产物,只能得到少量纯净的Rg4、Rg6混合物,很难得到较纯净的Rg2;采用AB-8大孔吸附树脂柱层析法,用不同浓度乙醇梯度洗脱,可将Rg2与Rg4、Rg6分开,为进一步提纯Rg2创造了有利条件。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 绪论
• 1.1 三七概况
• 1.1.1 三七的科属、起源及分布
• 1.1.2 三七的植物形态及生长特性
• 1.1.3 三七的药用历史记载及在中药中的作用
• 1.1.4 三七的现代药理作用
• 1.1.5 三七的化学成分
• 1.2 三七中的皂苷类化合物
• 1.2.1 皂苷的分类及理化性质
• 1.2.1.1 皂苷的分类
• 1.2.1.2 皂苷的理化性质
• 1.2.2 三七中的主要皂苷类型及其结构
• 1.2.3 三七中主要皂苷的药理作用
• 1.3 三七中皂苷成分的分离提取及分析检测方法
• 1.3.1 三七中皂苷成分的提取方法
• 1.3.2 三七中皂苷成分的分离纯化方法
• 1.3.3 皂苷的分析检测方法
• 1.4 天然皂苷类化合物的转化
• 1.4.1 皂苷类化合物结构转化的理论依据及应用价值
• 1.4.2 皂苷类化合物结构转化的方法
• 1.5 本论文的主要研究内容
• 第二章 材料与方法
• 2.1 实验材料
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 三七总皂苷的提取
• 2.2.1.1 三七须根中三七总皂苷的提取
• 2.2.1.2 三七主根中三七总皂苷的提取
• 2.2.2 三七总皂苷中主要皂苷单体的制备
• 2.2.2.1 硅胶柱层析法制备三七皂苷单体
• 2.2.2.2 大孔吸附树脂—硅胶柱层析法制备三七皂苷单体
• 2.2.2.3 结晶—硅胶柱层析法制备人参皂苷Re单体
• 1'>2.2.3 酶转化法制备人参皂苷Rg₁
• 1混合皂苷制备人参皂苷Rg₁'>2.2.3.1 酶转化Re与R₁混合皂苷制备人参皂苷Rg₁
• 1'>2.2.3.2 酶转化原人参三醇类皂苷（PPT）制备人参皂苷Rg₁
• 2、Rg₄和Rg₆的制备及分离'>2.2.4 人参皂苷Rg₂、Rg₄和Rg₆的制备及分离
• 2、Rg₄和Rg₆的制备'>2.2.4.1 人参皂苷Rg₂、Rg₄和Rg₆的制备
• 2、Rg₄和Rg₆的分离纯化'>2.2.4.2 人参皂苷Rg₂、Rg₄和Rg₆的分离纯化
• 2.2.5 分析方法
• 2.2.5.1 薄层层析法（TLC）
• 2.2.5.2 高效液相色谱法（HPLC）
• 第三章 结果与讨论
• 3.1 三七总皂苷的提取
• 3.1.1 三七须根与三七主根中总皂苷含量比较
• 3.1.2 高效液相色谱法（HPLC）测定三七须根与三七主根中总皂苷的组成
• 3.2 三七总皂苷中主要皂苷单体的制备
• 3.2.1 硅胶柱层析法制备三七总皂苷中主要皂苷单体
• 3.2.2 大孔吸附树脂—硅胶柱层析法制备三七总皂苷中主要皂苷单体
• 3.2.3 结晶—硅胶柱层析法制备人参皂苷Re单体
• 1'>3.3 酶转化法制备人参皂苷Rg₁
• 1混合皂苷制备人参皂苷Rg₁'>3.3.1 酶转化Re与R₁混合皂苷制备人参皂苷Rg₁
• 1'>3.3.2 酶转化原人参三醇类皂苷（PPT）制备人参皂苷Rg₁
• 2、Rg₄和Rg₆的制备及分离'>3.4 人参皂苷Rg₂、Rg₄和Rg₆的制备及分离
• 2、Rg₄和Rg₆的制备'>3.4.1 人参皂苷Rg₂、Rg₄和Rg₆的制备
• 2、Rg₄和Rg₆的分离纯化'>3.4.2 人参皂苷Rg₂、Rg₄和Rg₆的分离纯化
• 第四章 结论
• 参考文献
• 致谢