薄层液基细胞标本中P16、ΔNP63、 HPV16E7、Brn-3a的表达情况及与宫颈癌前病变关系的研究

论文摘要

目的: 研究肿瘤抑制基因 P16、凋亡相关基因异构体 ?NP63、HPV 致癌基因 HPV16E7 和细胞转录因子 Brn-3a 在各级宫颈上皮内瘤变（cervical intraepithelial neoplasia,CIN）的 TCT 标本中的表达情况以及各标志物之间的关系,讨论它们作为 CIN 的生物标志物的可行性。从分子生物学水平寻找新的 CIN 检测方法,以解决临床上细胞学筛查方法漏诊率高的问题。 方法: 1. 检测 TCT 涂片中 P16、ΔNP63 的表达情况:随机抽取 71 例疑诊 CIN 的患者行 TCT 检查以及阴道镜下活组织检查。其 TCT 残留标本,在 ThinPrep 系统控制下,制作 TCT 细胞涂片,利用 SP 免疫组化法分别检测标本中 P16、ΔNP63 的表达。 2. 检测 TCT 残留标本中 HPV16 E7 和 Brn-3a 的表达情况:取上述71 例患者的 TCT 残留标本,用 RT-PCR 法分别检测各标本中 HPV16E7和 Brn-3a mRNA 的表达。 结果: 1. 71 例患者的 TCT 细胞学诊断结果包括:13 例未见癌变或上皮内瘤变（Negative for Intraepithelial Lesion or Malignancy,NILM）,17例不典型鳞状上皮细胞（Atypical squamous cell,ASC）,19 例低度鳞状上皮内病变（low grade squamous intraepithelial lesion,LSIL）,22 例重庆医科大学硕士研究生学位论文 4高度鳞状上皮内病变（high grade squamous intraepithelial lesion,HSIL）;病理诊断结果包括2:1 例炎症1,9 例 CINⅠ1,0 例 CINⅡ2,1 例 CINⅢ 。2. TCT 涂片中 P16 阳性表达于核异常的鳞状上皮细胞和腺上皮细胞浆中。各级细胞学诊断的 P16 阳性率分别为 NILM（15.38%）,ASC（54.55%）,LSIL（95.45%）,HSIL（100%）,HSIL 与 NILM 以及 LSIL与 NILM 的 P16 阳性率进行比较,差异有极显著性（P<0.0001）,HSIL与 LSIL 以及 NILM 与 ASC 比较,差异无统计学意义（P>0.05）;各级病理学诊断中 P16 阳性率分别为炎症（4.76%）,CINⅠ（89.47%）,CINⅡ（100%）,CINⅢ（100%）,各级 CIN 与炎症的 P16 阳性率进行比较,差异有极显著性（P<0.0001）,各级 CIN 的阳性率进行两两比较,差异无统计学意义（P>0.05）。3. TCT 中 ?NP63 阳性表达于核异常的鳞状上皮细胞和部分腺细胞中。在细胞学诊断中 ?NP63 阳性率分别为 NILM（15.38%）,ASC（47.06%）,LSIL（89.47%）,HSIL（95.45%）,HSIL 的 ?NP63 阳性率高于 NILM、HSIL 与 ASC 组,LSIL 高于 NILM（P<0.001）,HSIL与 LSIL 以及 NILM 与 ASC 比较,差异无显著性（P>0.05）;在病理学诊断中,?NP63 阳性率分别为炎症（4.76%）,CINⅠ（84.21%）,CINⅡ（100%）,CINⅢ（100%）,各级 CIN 的 ?NP63 阳性率高于炎症组（P<0.001）,各级 CIN 的阳性率进行比较,差异无统计学意义（P>0.05） 。4. HPV16 E7 mRNA 表达按细胞学分级其阳性率分别为 NILM（7.69%）,ASC（29.41%）,LSIL（31.58%）,HSIL（59.09%）,HSIL的 HPV16 E7 阳性率高于 NILM 组（P<0.008）,NILM 与 ASC、NILM与 LSIL 以及 LSIL 与 HSIL 进行比较,差异无显著性（P>0.05）;按病理学分级 HPV16 E7 阳性率为炎症（0%）,CINⅠ（31.58%）,CINⅡ（60%）,CINⅢ（61.90%）,CINⅡ和 CINⅢ的 HPV16 E7 阳性率均高于炎症组（P<0.001）,各级 CIN 的阳性率进行两两比较,差异无显著重庆医科大学硕士研究生学位论文 5性（P>0.05）。5. Brn-3a mRNA 的阳性率在细胞学分级中分别为 NILM（7.69%）,ASC（23.53%）,LSIL（21.05%）,HSIL（72.73%）,HSIL 的 Brn-3a阳性率明显高于 NILM、ASC 以及 LSIL 组（P<0.001）,NILM、ASC与 LSIL 之间进行两两比较,差异无显著性（P>0.05）;在病理学分级中 Brn-3a 的表达阳性率分别为炎症（0%）,CINⅠ（5.26%）,CINⅡ（50%）,CINⅢ（90.48%）,CINⅢ的 Brn-3a 阳性率明显高于与炎症、CINⅠ组（P<0.0001）,炎症与 CINⅠ以及 CINⅡ与 CINⅢ比较,差异无显著性（P>0.05）。6. P16 与 ?NP63 作为 CIN 的诊断标志物,其结果是一致的（P<0.05）。HPV 致癌基因 HPV16 E7 与细胞转录因子 Brn-3a 作为 CIN和 HR-HPV 活化状态的诊断标志物,其结果是一致的（P<0.05）。结论:1. 过度表达的肿瘤抑制因子 P16 可成为 CIN 的标志物,辅助细胞学筛查,其阳性染色不仅有利于诊断异常鳞状上皮细胞,还可用于识别异常腺上皮细胞,并推测过度表达的 P16 有助于识别 ASC 中存在的瘤变亚型。2. 凋亡相关基因异构体 ?NP63 在宫颈异常鳞状上皮和腺上皮细胞中的高表达,可作为筛查 CIN 可靠的生物标志物,辅助细胞学筛查,降低漏诊率。3. P16 与 ?NP63 的过度表达与宫颈早期瘤变发生、发展关系密切,推测两者之间可能存在正向协同作用,并参与宫颈瘤变过程。4. HPV 致癌基因 HPV16 E7 作为 CIN 的生物标志物,并可直接说明患者体内 HR-HPV 活化状态。5. 细胞转录因子 Brn-3a 参与宫颈瘤变发展的过程,可作为另一个CINⅡ和 CINⅢ的生物标志物,并可成为 HPV 致癌基因转录活性的间

论文目录

• 英文缩写对照
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 第一部分 TCT 标本中P16、ΔNP63 的表达及其与宫颈癌前病变的关系研究
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 小结
• 第二部分 宫颈癌前病变TCT标本中HPV16 E7和Brn-3A mRNA表达水平的研究
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 小结
• 全文小结
• 附全文图片
• 全文参考文献
• 文献综述 宫颈癌前病变与生物标志物
• 致谢
• 攻读学位期间发表学术论文目录