红霉素对慢性阻塞性肺疾病大鼠MMP-9水平的影响

论文摘要

目的:本实验通过COPD大鼠模型并予以红霉素干预观察大鼠肺内MMP-9表达水平的变化。通过本实验认识和探讨体内实验红霉素对COPD大鼠肺内MMP-9表达的影响,进一步认识红霉素的抗炎作用,开拓红霉素在COPD的应用价值。方法:健康雄性Wistar大鼠36只（中南大学实验动物学部提供）,雄性,白色,SPF级,体重220±20 g。在安静、室温、避强光的环境中自由进食和饮水一周。36只Wister大鼠随机分为3组,每组12只:COPD模型组,第1、14天注射脂多糖（LPS）200ug/100ul,第2～13天、15～30天每日上午在72升（30cm×40cm×60cm）自制有机玻璃箱内被动吸烟,每天上午1次,每次12支,每次持续0.5h。红霉素干预组,造模方法同COPD组,每天熏烟前用红霉素灌胃治疗（剂量100mg/kg,配制成1.25%红霉素口服液）,从第17天开始进行,经气管内注入LPS的条件、烟熏条件以及持续时间均同COPD组,给药2周;正常对照组,标准饲养30天,不做任何干预,第1、14天气管内注入生理盐水100ul。大鼠肺功能测定由湘雅医学院病理生理研究所完成,经微机处理计算出FEV0.3/FVC、R1及Cdyn。左肺10%的中性福尔马林灌注固定20min,再浸入福尔马林固定,常规脱水,石蜡包埋,切片,HE染色,以进行病理形态学观察和免疫组化检测。用免疫组化方法检测各组大鼠肺组织MMP-9的表达,逆转录聚合酶链反应（reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR）检测各组大鼠肺组织MMP-9 mRNA表达水平。结果:（1）模型组及干预组大鼠渐出现饮食、活动减少,平均体重较正常对照组减轻,后期可见毛发干枯、发黄,可听到喘息音,正常对照组未见以上情况出现。（2）模型组及干预组大鼠FEV0.3/FVC（%）、R1（气道阻力）、Cdyn（动态肺顺应性）均明显低于正常对照组,差异有显著性（均P＜0.05）,说明小气道气道阻力增加,存在明显气流受限、阻塞性肺通气功能障碍。（3）光镜下模型组及干预组大鼠肺组织符合慢性支气管炎和阻塞性肺气肿病理改变。（4）模型组肺组织中MMP-9蛋白平均阳性系数显著高于对照组（P＜0.05）,干预组与模型组比较阳性系数降低（P＜0.05）。（5）模型组大鼠肺组织中MMP-9mRNA表达量高,其光密度比值显著高于正常对照组（P＜0.05）;干预组与模型组光密度比值比较亦降低（P＜0.05）。结论:（1）采用被动吸烟和LPS气道内滴注相结合构建的大鼠COPD模型,能成功复制出COPD大鼠模型。（2）COPD大鼠肺组织中MMP-9水平显著增高,在COPD的发病机制中可能起重要作用。（3）红霉素治疗COPD大鼠从基因水平下调MMP-9的表达抑制炎症细胞的移行而减弱炎症反应。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 缩略词表
• 第一章 前言
• 第二章 材料与方法
• 2.1 材料
• 2.1.1 实验动物
• 2.1.2 主要试剂及来源
• 2.1.3 引物
• 2.1.4 主要仪器及设备
• 2.2 方法
• 2.2.1 动物分组及处理
• 2.2.1.1 分组及COPD模型建立
• 2.2.1.2 大鼠肺功能测定
• 2.2.1.3 取材方法
• 2.2.2 指标检测
• 2.2.2.1 用免疫组化方法检测各组大鼠肺组织MMP-9的表达
• 2.2.2.2 用显微图像分析系统测定各组大鼠肺组织MMP-9的阳性系数及灰度值
• 2.2.2.3 逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）测定各组大鼠肺组织MMP-9 mRNA表达水平
• 2.2.2.3.1 肺组织总RNA的提取步骤
• 2.2.2.3.2 RT-PCR
• 2.2.3 统计学处理
• 第三章 结果
• 3.1 一般情况观察
• 3.2 肺功能测定
• 3.3 光镜下大鼠肺及支气管组织的病理学观察
• 3.4 大鼠肺组织中MMP-9蛋白的表达
• 3.5 大鼠肺组织中MMP-9 mRNA的表达
• 第四章 讨论
• 第五章 结论
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 致谢
• 攻读学位期间研究成果