苦瓜几丁质酶和益母草抗菌肽基因（CHI和AFP）转化黑麦草的研究

论文摘要

随着黑麦草研究的不断深入,利用现有的抗性基因提高黑麦草抗性能力成为重要趋势。本研究使用苦瓜几定质酶和益母草抗菌肽基因（CHI-AFP）对黑麦草进行遗传转化。黑麦草（Ryegrass,Lolium muhiflorum Lam）营养丰富,经济价值高。贵州省草业研究所于2005年引进国内外优良的一年生黑麦草品种。因为,黑麦草叶中富含叶蛋白或称绿色蛋白浓缩物（Leaf protein concentration,LPC）是一种高质量浓缩蛋白质,属“功能性蛋白”。不仅是畜禽生长发育的主要营养物质,也是人类,特别是青少年的保健营养理想食品。因此,黑麦草蛋白深加工产品开发有着十分广阔的前景。像其它大多数作物一样,黑麦草的遗传改良一直依赖于传统育种手段,虽然许多性状已得到明显改进,但改良的局限性很明显。基因工程育种途径不仅可以改良草坪草的抗逆性和生物学特性范围,而且可以缩短草坪草育种年限。研究结果如下:以多年生黑麦草-卓越品种的成熟胚性愈伤组织为材料进行了组织培养和遗传转化研究。筛选出最适分化培养基为:MS+2.0mg/L 6-BA+0.1mg/L 2,4-D,最适生根培养基为:1/2MS。摸索出农杆菌遗传转化的共培养时间、农杆菌OD值、AS浓度、浸染时间等因素的优化体系。结果表明,AS浓度对转化植株分化率的影响最为显著。以嵌入真核生物内含子的gus基因表达的组织化学染色鉴定以及PCR检测,获得转基因植株,并对其进行了初步的抗病害检测,发现转基因植株对立枯丝核菌有一定抗性。

论文目录

• 目录
• 摘要
• Abstract
• 第一章 文献综述
• 1.引言
• 2.植物抗病基因工程研究进展
• 2.1 抗病基因克隆策略
• 2.2 已克隆的抗病基因及其结构特征
• 2.3 几丁质酶及其在植物抗病基因工程中的应用
• 2.4 抗菌肽及其在植物抗病基因工程中的应用
• 3.草坪草基因工程研究进展
• 4.本研究的目的和意义
• 第二章 CHI和AFP双价基因转化黑麦草的研究
• 1 材料
• 1.1 植物材料
• 1.2 菌株与质粒
• 1.3 主要生物化学试剂
• 1.4 主要仪器
• 1.5 常用培养基
• 1.6 常用溶液
• 2 实验方法
• 2.1 质粒的鉴定
• 2.2 黑麦草的遗传转化
• 3.结果与分析
• 3.1 质粒的验证
• 3.2 PCR和RT-PCR检测
• 3.3 黑麦草转化过程中的影响因素分析
• 3.4 转基因植株对除草剂的抗性检测
• 3.5 转基因黑麦草对立枯丝核菌的抗性分析
• 4.讨论
• 4.1 影响农杆菌转化效率的因素
• 4.2 转基因植株抗病性
• 参考文献
• 缩略词表
• 致谢
• 附录
• 图版