当归多糖对小鼠骨髓基质细胞黏附分子表达及其黏附功能的影响

论文摘要

骨髓基质细胞（bone marrow stromal cell,BMSC）是造血微环境的主要组成部分,一方面通过分泌体液因子调控造血;另一方面,通过细胞间的直接接触作用于造血干/祖细胞（hematopoietic progenitor/stem cell,HSPC）的各个阶段,BMSC与造血细胞之间的直接接触是通过其表面的粘附分子来实现的,对造血细胞的增殖与分化起直接支持作用,并且参与HSPC的动员和归巢,其结构和功能的完整性对于保护机体造血的稳定性具有十分重要的作用。粘附分子分为整合素家族、选择素家族及免疫球蛋白基因超家族等多种。其中细胞间粘附分子-1 （intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1,CD54）和血管细胞粘附分子-1 （vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1,CD106）是免疫球蛋白基因超家族中最常表达的两种粘附分子,在介导BMSC对造血细胞的粘附及二者间的信息传递方面起重要作用。VCAM-1和ICAM-1有多种功能:能协助造血细胞粘附定位于利于发育的微环境;参与造血细胞与基质细胞形成多聚体;参与HSPC的动员。近年来,VCAM-1、ICAM-1等黏附分子已成为研究的热点。1当归作为中医“补血、活血”要药已有数千年的临床应用历史。研究表明:当归多糖（Angelica polysaccharides,APS）是当归中促进造血的有效成分,对正常或贫血小鼠的髓系造血祖细胞（BFU-E、CFU-E、CFU-GM和CFU-MK）的增殖分化有显著的促进作用;同时APS在体外可促进人红系、粒单系及混合系造血祖细胞的增殖与分化。前期实验已经证实:APS对小鼠HSPC有一定的动员作用,与重组人粒细胞集落刺激因子（recombinate human granulocyte colony- stimulating factor,rhG-CSF）联合动员的效果好于单用APS或单用rhG-CSF的动员效果,并且APS动员的小鼠HSPC能够重建造血衰竭小鼠长期造血。目前关于BMSC在造血干细胞（hematopoietic stem cell, HSC）动员中的作用已有很多报道。但是APS的动员机制还未见报道,其动员作用是否是通过改变粘附分子如ICAM-1和VCAM-1的表达及其黏附功能来实现有待进一步深入探讨。这一研究结果将为改善骨髓造血微环境,促进HSPC的动员提供新的思路。本研究以BALB/c小鼠为实验动物模型,分为两个部分进行实验研究:1.细胞密度和血清对小鼠BMSC体外生长的影响。2. APS对小鼠BMSC生长、黏附分子表达及其黏附功能的影响。本研究旨在探讨APS促进造血以及参与HSPC动员的可能机制,其深入研究将为进一步开发和利用当归提供理论与实验依据。1.细胞密度和血清对小鼠BMSC体外生长的影响目的:研究不同细胞接种密度、血清浓度及种类对小鼠BMSC体外生长的影响。方法:设置不同细胞密度、不同种类血清及血清量的培养体系,观察小鼠BMSC的贴壁情况,细胞80%贴壁时间,用台盼蓝排斥试验检测活细胞率,MTT法检测细胞增殖情况,HE染色光镜下观察细胞形态。结果:1.原代全血培养的小鼠BMSC适宜接种密度为（1～4）×106/ mL。2.细胞最适生长的血清浓度为10%～20%。3.与胎牛血清相比马血清对小鼠BMSC的促增殖作用更好（P<0.05）。4.不同种类血清培养的小鼠BMSC类型有一定差异（P<0.05）。结论:不同细胞接种密度及血清浓度和血清种类对小鼠BMSC体外生长有一定影响。2.当归多糖对小鼠BMSC黏附分子表达和黏附功能的影响目的:研究APS对小鼠BMSC增殖、粘附分子ICAM-1和VCAM-1的表达及其对骨髓单个核细胞黏附功能的影响。方法:观察APS对小鼠BMSC消化时间的影响;MTT法检测APS对小鼠BMSC增殖及对骨髓单个核细胞黏附功能的影响;流式细胞术检测APS体内外对小鼠BMSC表面黏附分子ICAM-1和VCAM-1表达的影响。结果:1. 100,200 mg/L APS使BMSC达80%贴壁后消化时间明显缩短（P<0.05）。2. 50,100 mg/L APS组BMSC增殖能力较强（P<0.05）。3.体外培养中加入200,300 mg/L APS能使BMSC表面ICAM-1表达降低;加入50,100,200,300 mg/L APS均可使VCAM-1表达降低（P<0.05）。小鼠体内腹腔注射1,2,4,6 mg/kg APS均可使ICAM-1、VCAM-1表达比对照组降低（P<0.05）。4. 100,200,300 mg/L APS使小鼠BMSC对骨髓单个核细胞黏附率减弱（P<0.05）。结论:APS能促进小鼠BMSC增殖,降低其表面黏附分子ICAM-1和VCAM-1的表达,进而使小鼠BMSC达80%贴壁后消化时间明显缩短,对骨髓单个核细胞的黏附率减弱。综上所述,APS能促进小鼠BMSC增殖,降低黏附分子ICAM-1和VCAM-1的表达进而改变BMSC的黏附能力,进一步研究其在改善造血微环境及HSC动员中的作用将为开发和利用当归并为寻找新的动员剂提供实验依据。

论文目录

• 符号说明
• 中文摘要
• 英文摘要
• 论文正文 当归多糖对小鼠骨髓基质细胞黏附分子表达及其黏附功能的影响
• 第一部分 细胞密度和血清对小鼠骨髓基质细胞体外生长的影响
• 前言
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 小结
• 5 参考文献
• 第二部分 当归多糖对小鼠骨髓基质细胞增殖及其黏附分子表达的影响
• 前言
• 1 材料与方法
• 2 实验结果
• 3 讨论
• 4 小结
• 5 参考文献
• 结论
• 图片
• 文献综述
• 致谢
• 硕士期间发表的文章