论文摘要
试验一不同能量来源和水平对产蛋鸡脂肪肝的诱导作用摘要：本实验研究了不同能量来源和水平对产蛋鸡脂肪肝的诱导作用以及对脂肪肝的预测指标进行筛选。选取150只高产期（30周龄）罗曼粉壳蛋鸡,随机分成3组,每组10个重复,每个重复5只鸡。分别饲喂三种日粮,其中对照组代谢能为2.65Mcal／kg;油脂组代谢能为3.06Mcal／kg；淀粉组代谢能为3.00Mcal／kg。结果显示：高能日粮极显著降低采食量和产蛋率（P<0.01）；淀粉组蛋重极显著低于对照组和油脂组（P<0.01）；饲喂油脂和淀粉可以极显著提高产蛋鸡肝脏脂肪含量（P<0.01）。在第1天,第29天,第43天采血中,油脂组和淀粉组血浆ALT和AST极显著高于对照组（P<0.01）；油脂组血浆LDH较对照组有显著提高（P<0.05）,淀粉组血浆LDH有增加的趋势；油脂和淀粉可以极显著提高蛋鸡肝脏粗脂肪含量,提高幅度分别为71.9%和82.9%,而对胆固醇和磷脂无显著影响；油脂可以提高血浆中TG和TC的含量（P<0.01）,淀粉可以极显著提高血浆中TC的含量（P<0.01）,但是对血浆TG无影响。饲喂高能日粮以后,油脂组血浆MDA水平较对照组极显著提高95.7%,淀粉组较对照组提高76.9%（P<0.01）,而且淀粉可以显著提高血液胰岛素和雌二醇的含量（P<0.05）。结果提示, ALT、AST和TC可以作为预测脂肪肝的有效指标,而碳水化合物（淀粉）可以更有效的诱导脂肪在肝脏中的沉积,油脂对肝脏的损害程度大于碳水化合物。试验二不同能量来源和水平对产蛋鸡肝脏MTP, SREBP-1C, ChREBP基因表达的影响摘要：采用分段克隆测序,并用生物信息学拼接的方法,首次克隆并测出鸡MTP基因的全长CDS序列,据此设计了MTP的荧光定量PCR反应引物。本实验动物试验同实验一,采样后采用定量PCR（SYBR）,以β-actin基因为内参基因,研究不同能量来源和水平对产蛋鸡肝脏MTP, SREBP-1C, ChREBP基因表达的影响。结果表明：淀粉可以极显著提高产蛋鸡SREBP-1C表达量（P<0.01）,较对照组提高258%,油脂则提高了产蛋鸡SREBP-1C表达量（P>0.05）；淀粉也显著提高产蛋鸡ChREBP表达量（P<0.05）,油脂对产蛋鸡ChREBP表达量无显著影响（P>0.05）。在获得了MTP全长CDS序列后,本试验从GenBank核酸数据库中下载了不同物种（包括人类、猪、牛、鱼、老鼠等）MTP基因的CDS序列,并进行了序列分析。结果表明,本试验测得的MTP基因与计算机模拟的的鸡MTP基因具有最高的相似程度,其同源性为99.7%,而与其他的动物如猪,狗,猴,短尾负鼠、新杆状线虫、海胆等MTP基因的同源性差。由此结果可以看出,克隆的MTP基因序列属于禽的MTP,与其他动物的亲缘关系较远。试验三能量来源对产蛋鸡肝脏脂肪代谢的影响及其机制研究本实验研究了不同能量来源（油脂和淀粉）对产蛋鸡肝脏脂肪代谢的影响及其机制研究。选用体重接近,体况良好的高产罗曼粉壳蛋鸡（30周龄）120只,随机分为5组,8重复／组,3只／重复。受试鸡单独给料,限制饲养,日粮按照中国家禽饲养标准（2004）且日采食量按照120克日粮作为限饲标准,所有蛋鸡按此标准限饲到90%。五种试验日粮日采食量如下,基础料（玉米-豆粕型）108克／天；油脂组提供63克／日；淀粉组94.4克／天；油脂组63克／日+Metformin0.55克／日：淀粉组94.4克／天+Metformin0.55克／日。结果显示：淀粉可以显著提高产蛋鸡肝脏脂肪含量（P<0.05）,极显著提高肝脏胆固醇水平（P<0.01）,对磷脂无显著影响（P>0.05）；油脂可以提高产蛋鸡肝脏粗脂肪含量,但是差异不显著（P>0.05）,油脂都能显著或极显著提高产蛋鸡肝脏胆固醇和磷脂含量（P<0.05或P<0.01）。油脂可以极显著提高ALT的含量（P<0.01）,对AST、TG和TC均无显著影响（P>0.05）；而淀粉组血浆AST浓度较对照组显著提高了55%（P<0.05）,淀粉对AST、TG和TC均无显著影响（P>0.05）,添加Metformin可以加重产蛋鸡肝脏的转氨酶释放,但是,却极显著降低了血脂TG的含量（P<0.01）,对TC则无显著影响（P>0.05）。高油脂的日粮可以极显著降低小肠微绒毛高度（P<0.01）,可以显著增加隐窝深度（P<0.05）,油脂可以提高消化道食糜中脂肪酶活性（P<0.01）；而淀粉对小肠微绒毛和隐窝均无显著影响（P>0.05）,当淀粉中加入Metformin则极显著降低了小肠微绒毛高度,同样,淀粉可以极显著提高食糜中淀粉酶的活性（P<0.01）,淀粉对油脂酶活性没有影响。在油脂和淀粉组中添加Metformin对消化酶无显著影响（P>0.05）。淀粉和油脂均降低了血浆中VLDL和ApoB-100水平,但是差异没有达到显著水平（P>0.05）,其中较对照组相比,淀粉组VLDL降低了9%,油脂组VLDL降低了12%,两个组中VLDL和ApoB-100显示出一致的趋势；添加Metformin以后,VLDL和ApoB-100的浓度均出现了显著的降低（P<0.05）。淀粉可以极显著提高MTP、SREBP-1C和ChREBP基因表达量（P<0.01）,与对照组相比,淀粉组MTP基因mRNA表达量提高了52.8%,SREBP-1C基因mRNA表达量提高了265%,ChREBP基因mRNA表达量提高了76.4%。油脂有提高MTP、SREBP-1C和ChREBP基因mRNA表达量的趋势,但是差异不显著（P>0.05）。添加Metformin以后,SREBP-1C和ChREBP基因mRNA表达量出现显著或极显著降低（P<0.05或P<0.01）,而MTP基因mRNA表达量则无显著变化（P>0.05）。淀粉可以极显著提高肝脏ACC活性（P<0.01）,而油脂则显著降低了ACC活性（P<0.05）,添加Metformin的淀粉组和油脂组,ACC活性较对照组相比无显著差异（P>0.05）；淀粉可以极显著提高FAS活性,油脂对FAS合成酶无显著影响,添加Metformin的淀粉组和油脂组对FAS活性无显著影响（P>0.05）；油脂可极显著提高CPT-1活性（P<0.01）,淀粉组也能提高CPT-1活性（P<0.05）,而加入Metformin以后发现,CPT-1活性均极显著提高。淀粉和油脂对LPC和G-6-P活性无显著影响（P>0.05）,Metformin组结果可以看出,添加Metformin可以降低LPC的活性,但是差异没有达到显著水平（P>0.05）。添加Metformin的油脂组和淀粉组G-6-P活性较未添加Metformin的淀粉组和油脂组G-6-P活性有降低的趋势,但是差异也不显著（P>0.05）。结果显示：淀粉可以通过调节生脂基因的表达和激活脂肪酸相关合成酶活性大量合成脂肪,而油脂则对内源脂肪酸的合成没有影响,油脂可能会直接进入肝细胞保存起来,从而也会导致肝脏脂肪含量的增加,由于外源脂肪进入肝脏以后更用以进入线粒体氧化,本实验可以看出,油脂比淀粉更能促进脂肪的氧化,从而造成氧化损伤的加剧。本试验显示,淀粉和油脂无法加快脂肪的释放,这个也是造成肝脏脂肪沉积的原因之一。