丙酮酸钠与其二聚体的混合物对人脐静脉内皮细胞的影响

论文摘要

血液是人体内重要的流体组织。如果出现严重创伤、手术或食管静脉曲张破裂等，在短时间内丢失大量血液，严重时就会导致失血性休克。液体复苏是救治休克的重要措施，可以快速补充血容量，维持组织灌注压。但目前常用的复苏液都能引起不同程度的复苏损伤。丙酮酸作为最简单的α-酮酸，它的钠盐，即丙酮酸钠，在失血性休克的救治时表现出了优越的性能，具有非常好的应用前景。但是丙酮酸钠极易发生缩合反应生成二聚体，而二聚体曾被证明能对线粒体内的三羧酸循环产生抑制作用。但是目前尚没有关于丙酮酸钠和二聚体的混合物是否仍然具有抑制作用的报道，尤其是在细胞和动物水平上的研究。本论文就此在细胞水平上进行了研究，主要完成以下几方面的工作：（1）建立了能对水溶液中的丙酮酸钠进行定量分析的离子对反相液相色谱法，并对用NaOH将pH调节到12时，丙酮酸钠发生缩合反应的速率进行了测定。（2）发现丙酮酸钠和二聚体的钠盐在乙酸中的溶解度有巨大差异，并据此得到了纯度大于98%的二聚体钠盐。（3）选取人脐静脉内皮细胞作为实验细胞，发现丙酮酸钠和二聚体的混合物作用于细胞后，会导致MTT实验中OD570值的降低，并且与混合物的浓度，二聚体的比例及作用时间呈正相关。进一步的研究发现，即使含二聚体比例最高的混合物也没有引起细胞凋亡，线粒体膜电位依然维持在较高水平，并且还能使细胞内活性氧的水平有所下降，表明混合物并不会对细胞造成明显的伤害。所以如果能将丙酮酸钠中的二聚体含量控制在较低的比列，建立相关质量标准，丙酮酸钠就有望作为复苏液应用于临床，进行失血休克救治。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第1章 绪论
• 1.1 引言
• 1.2 低血容量休克概述
• 1.3 失血性休克的救治
• 1.3.1 失血的分级
• 1.3.2 失血性休克的病理生理反应
• 1.3.3 失血性休克的监测
• 1.3.4 失血性休克的治疗
• 1.3.5 失血性休克的复苏终点
• 1.4 目前所使用的复苏液的主要缺陷
• 1.4.1 胶体复苏液的主要缺陷
• 1.4.2 常用晶体复苏液的主要缺陷
• 1.5 丙酮酸钠溶液作为复苏液的优势
• 1.5.1 丙酮酸及丙酮酸钠概述
• 1.5.2 丙酮酸作为失血性休克复苏液的治疗作用
• 1.5.3 丙酮酸钠复苏液的应用前景
• 1.6 丙酮酸钠溶液作为复苏液存在的安全性问题
• 1.7 本课题的主要研究内容
• 第2章 HPLC 法分析水溶液中丙酮酸钠含量
• 2.1 引言
• 2.2 实验试剂与仪器
• 2.2.1 实验设备及材料
• 2.2.2 实验试剂
• 2.3 实验方法
• 2.3.1 样品溶液的制备
• 2.3.2 检测波长的选择
• 2.3.3 反相色谱条件的选择
• 2.3.4 离子对反相色谱条件的选择与优化
• 2.3.5 线性与范围、精密度与准确度检验
• 2.3.6 二聚体的纯化
• 2.3.7 二聚体的结构鉴定
• 2.3.8 二聚体的纯度与色谱峰的归属检验
• 2.3.9 丙酮酸钠发生缩合反应的规律检验
• 2.4 结果与讨论
• 2.4.1 检测波长的选择
• 2.4.2 反相色谱分析方法的建立
• 2.4.3 离子对反相色谱分析方法的建立
• 2.4.4 线性关系、精密度、准确度检验
• 2.4.5 二聚体的制备
• 2.4.6 二聚体的结构鉴定
• 2.4.7 二聚体的纯度及色谱峰的专属性检验
• 2.4.8 二聚体的生成规律
• 2.5 本章小结
• 第3章 丙酮酸钠与其二聚体的混合物对人脐静脉内皮细胞的影响
• 3.1 引言
• 3.2 实验试剂与仪器
• 3.2.1 实验试剂
• 3.2.2 实验仪器与材料
• 3.3 实验方法
• 3.3.1 溶液和缓冲液的配制
• 3.3.2 HUVEC 的复苏
• 3.3.3 HUVEC 的传代培养
• 3.3.4 HUVEC 的冻存
• 3.3.5 丙酮酸钠溶液对培养基晶体渗透压的影响
• 3.3.6 MTT 法检测丙酮酸钠或其与二聚体混合物对 HUVEC 的影响
• 3.3.7 细胞凋亡的检测
• 3.3.8 细胞线粒体膜电位的检测
• 3.3.9 细胞活性氧含量的检测
• 3.4 实验结果
• 3.4.1 细胞培养
• 3.4.2 丙酮酸钠溶液对培养基晶体渗透压的影响
• 3.4.3 MTT 实验结果
• 3.4.4 细胞凋亡检测结果
• 3.4.5 线粒体膜电位检测结果
• 3.4.6 活性氧检测结果
• 3.5 结果讨论
• 3.6 本章小结
• 结论
• 附录
• 参考文献
• 攻读硕士学位期间承担的科研任务与主要成果
• 致谢
• 作者简介