应激QTL座位22个微卫星标记以及MOR基因多态与猪运输应激反应性状关系的研究

论文摘要

本研究旨在分离鉴定猪运输应激相关的遗传标记或功能基因。选用两种不同品种的猪,二花脸猪和皮特兰猪,及其杂交后代为动物模型,对仔猪进行翻背测试,及对肥猪进行长途运输应激。首先探讨应激QTL的22个微卫星标记与F2代（皮×二）猪运输应激反应性状（神经内分泌和肉质）和翻背评分之间的相关;然后检测了纯种二花脸猪和皮特兰猪的mu-阿片受体基因（MOR）的多态性和MOR在垂体的mRNA水平,分析MOR基因的单核苷酸多态与应激性状（包括翻背评分、运输的血浆皮质醇水平）的相关性。研究结果如下:1.应激QTL的22个微卫星标记与猪的翻背评分和运输应激性状的相关性分析在以纯种的皮特兰猪和二花脸猪为亲本建立的F2资源群体中选取52头猪,对仔猪进行出生后第3、10和17d的翻背测试实验（翻背评分分别记为BS3、BS10、BS17）。测定运输后的血浆应激和代谢相关激素水平:Insulin、ACTH、Cortisol、T3和T4;运输结束后宰杀,测定6项肉质指标:pH45min、pH24h、嫩度、系水力、蒸煮损失和肉色评分（1*,a*,b*）;以上指标作为运输应激性状。在已知的应激性状QTL座位区域内选择22个微卫星标记,对各微卫星标记的多态与翻背评分和运输应激性状进行了相关性分析。结果表明:各位点等位基因数为3～8个,杂合度为0.415 5～0.743 2,多态信息含量为0.365 1～0.815 0。方差分析显示:SW2446对BS3影响达到显著水平（P＜0.05）;SW2446（P＜0.01）、SW1816（P＜0.05）和SW0092（P＜0.05）对BS10有显著影响;SW2108、SW1816和SW1023对BS17有显著影响（P＜0.05）;SW1808（P＜0.01）和SW0320（P＜0.05）对ACTH有显著影响;SW1303对Insulin,SW1092对Cortisol,SW0320对T3,S0101对T4有显著影响;S0101对肉色a*有极显著影响（P＜0.01）;SW1023对系水力有显著影响（P＜0.05）;SW1808对系水力有极显著影响（P＜0.01）,对肉色1*、a*有显著影响（P＜0.05）;S0112和S0092对pH45min有显著影响（P＜0.05）。这些微卫星标记对运输应激性状存在显著影响。2.MOR的多态性与猪的翻背测试和运输应激血浆皮质醇（Cortisol）水平的相关性分析用PCR-SSCP方法对12头纯种皮特兰猪和25头纯种二花脸猪MOR基因进行多态性分析,以GAPDH基因为内标,用real time PCR法对MOR基因的在垂体中的表达进行了相对定量分析。在仔猪出生后第3、10和17d进行翻背测试实验,并于140-150日龄时对6头皮特兰猪和9头二花脸猪进行2h运输应激实验,检测运输过程的-15（基础水平）、0、15、30、60、120、和135min,共7个时间点的血浆Cortisol水平。分析MOR各基因型之间在垂体mRNA表达水平、“Backtest Score”和血浆Cortisol水平的差异。结果表明,MOR基因在992位点有A→G的碱基突变,所有的皮特兰猪都是AA型纯合子,并且都是Halnn;所有的二花脸猪都是GG型纯合子,并且都是HalNN。AA基因型个体垂体中MOR的mRNA表达水平显著高于GG型个体（P＜0.01）:AA基因型个体的翻背评分高于GG型（P＜0.01）;GG基因型个体的基础及应激的血浆Cortisol水平显著高于AA型（P＜0.05）。猪的MOR基因的A992G多态可能与运输应激反应的个体差异有关。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 本文部分缩略语中英文对照
• 第一部分 文献综述
• 第一章 猪运输应激研究进展
• 1 应激的基本概念、基本原理及其对机体的影响
• 1.1 应激的基本概念及其发生原理
• 1.2 应激的生理反应
• 1.3 动物应激的行为反应
• 2 运输应激的特点
• 2.1 运输应激对猪肉品质的影响
• 2.2 运输应激的实验设计
• 2.3 应激反应程度测定的指标选择与分析
• 2.4 应激反应的遗传
• 参考文献（REFERENCES）
• 第二章 MU-阿片受体的研究进展
• 1 β-内啡肽的简介
• 1.1 β-内啡肽的分布
• 1.2 β-内啡肽的合成与释放
• 2 mu-阿片受体的结构与分布
• 3 MOR与应激的关系研究
• 3.1 MOR系统对HPA轴的抑制性作用
• 3.2 MOR基因在应激状态下的表达
• 3.3 MOR基因的SNPs与应激的关系
• 参考文献（REFERENCES）
• 第三章 猪应激分子标记研究进展
• 1 动物遗传标记
• 1.1 微卫星DNA
• 1.2 限制性片段长度多态性
• 1.3 单链构象多态性
• 1.4 单核苷酸多态性
• 2 应激反应的分子遗传标记研究进展
• 2.1 应激相关的候选基因法的研究
• 2.2 应激相关的QTL定位方面的研究进展
• 参考文献（REFERENCES）
• 第二部分 实验研究
• 第四章 应激QTL座位的22个微卫星标记与猪运输应激性状的相关性研究
• 1 实验材料
• 1.1 实验猪群
• 1.2 微卫星引物
• 1.3 实验试剂
• 1.4 主要仪器
• 1.5 所需溶液的配方
• 2 实验方法
• 2.1 性格鉴定
• 2.2 运输实验
• 2.3 收集血样
• 2.4 测定激素浓度
• 2.5 肉质性状测定方法
• 2.6 组织样中DNA的提取
• 2.7 PCR反应
• 2.8 电泳及结果记录
• 3 数据处理及统计分析
• 4 结果与分析
• 4.1 微卫星的基因频率、基因型频率计算、多态信息含量计算
• 4.2 翻背评分和运输应激反应指标（血浆激素应激）相关性分析
• 4.3 运输应激指标（肉质性状）相关性分析
• 4.4 微卫星标记与运输应激指标（血浆激素应激）和翻背评分的方差分析
• 4.5 微卫星标记基因型间运输应激指标（肉质性状）的方差分析
• 5 讨论
• 5.1 关于F2群体构建
• 5.2 多态信息含量和平均杂合度
• 5.3 应激指标的选择依据
• 5.4 微卫星位点与应激指标的方差分析
• 参考文献（REFERENCES）
• 第五章 MOR基因A992G多态与猪运输应激反应的相关性分析
• 1 实验材料
• 1.1 实验猪群
• 1.2 引物的设计与合成
• 1.3 实验试剂
• 1.4 主要仪器
• 1.5 所需溶液的配方
• 2 实验方法
• 2.1 性格鉴定
• 2.2 运输实验
• 2.3 收集血样
• 2.4 测定激素浓度
• 2.5 组织样中DNA的提取
• 2.6 垂体总RNA的提取
• 2.7 PCR-SSCP检测MOR基因多态
• 2.8 Hal的PCR-RFLPSs分析
• 2.9 荧光定量real time PCR分析
• 2.10 数据分析
• 3 结果与分析
• 3.1 MOR和Hal基因多态性
• 3.2 垂体的MOR基因的mRNA水平
• 3.3 翻背评分
• 3.4 血浆cortisol水平
• 4 讨论
• 参考文献（REFERENCES）
• 全文总结
• 致谢
• 攻读硕士学位期间发表的学术论文目录