香菇优良杂交菌株的初步选育

论文摘要

本试验以香菇（Lentinula edodes）4个栽培菌株[武香一号（W1）、L205、秋6、L271]和2个野生菌株（SHL12、SHL44）为试验材料,根据优势互补的原则形成4对杂交组合,采用单-单及单-双两种方式进行杂交,依据吃料速度和漆酶活性测定,筛选获得87个杂交子进行出菇试验,运用灰色关联度分析方法对供试菌种8个主要性状值[菌盖直径、菌盖厚度、菌柄长度、菌柄直径、平均单菇鲜重、单袋平均鲜菇产量、单袋平均菇数、出菇期]进行综合评价。从44个正常出菇的杂交菌株中,初步筛选出综合性状较优良的6个杂交菌株（XZ-3、XZ-8、XZ-40、XZ-74、XZ-81和XZ-87）进入中试。运用IRAP标记对杂交组合W1×SHL12的39个杂交子进行了遗传分析。采用扩增重复性好、谱带清晰的12对引物,扩增共获得128条带,其中127个多态性条带,多态性比例为99.2%。根据引物扩增图谱,采用软件NTSYS2.10e进行聚类分析并计算菌株间的遗传相似系数。结果显示,所有供试菌株在0.69的水平上聚为两类。第Ⅰ类菌株中,除XZ-27、XZ-28之外,均为单-单杂交获得的杂交子；第Ⅱ类菌株中,除XZ-5、XZ-23之外,均为单-双杂交获得的杂交子。菌株XZ-10与XZ-11出菇很少,个体较大,在0.88相似水平上聚为一类。XZ-3、XZ-8出菇数量适中,个大肉厚,产量远高于两亲本,与XZ-2在0.77水平上聚为一类。XZ-19、XZ-20、XZ-27出菇较少,个体较小,菌袋易吐黄水,在0.83水平上聚为一类。XZ-5、XZ-23两个菌株均未出菇,在0.83水平上聚为一类。XZ-7与XZ-17的菌丝均能长满菌袋,但栽培袋不起瘤状物,亦不转色,在0.86水平上聚为一类。试验结果表明,IRAP分析能较好地反映香菇种质的遗传多样性,依据IRAP指纹图谱进行的聚类分析,可用于香菇优良杂交菌株的初步筛选中,从而进一步提高杂交育种工作的效率。采用TRAP、ISSR、SSR、RAPD、SRAP分子标记的方法,对杂交组合中6个亲本菌株（武香一号、L205、秋6、L271、SHL12、SHL44）和55个单核体亲本（武香一号单核体16个、L205单核体7个、秋6单核体3个、L271单核体10个、SHL12单核体9个、SHL44单核体10个）进行遗传分析。28对扩增重复性好、谱带清晰的引物,在W1×SHL12组合中共扩增出912个条带,多态性条带数为850个,占总条带数的93.2%；在L205×SHLl2组合中共扩增出924条带,多态性条带数为877条,占总条带数的94.9%；在L205×SHL44组合中共扩增出863条带,多态性条带数为806条,占总条带数的93.4%；在秋6×L271组合中共扩增出780条带,多态性条带数为700条,占总条带数的89.7%。聚类结果很好的反映了各菌株间的亲缘关系,但亲本间的遗传距离与栽培试验中正常出菇的44个杂交子主要农艺性状值及灰色关联度法分析结果间的相关性均较低。用分子标记估算亲本遗传距离与杂种后代综合性状间的相关性存在诸多不确定性,不仅受遗传背景的影响,在一定程度上也受环境因子的影响。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 前言
• 1.1 香菇概述
• 1.1.1 营养价值及药用功效
• 1.1.2 资源分布
• 1.1.3 栽培现状
• 1.2 食用菌育种方法
• 1.2.1 野生食用菌驯化育种
• 1.2.2 人工选择育种
• 1.2.3 诱变育种
• 1.2.4 杂交育种
• 1.2.5 原生质体技术育种
• 1.2.6 基因工程育种技术
• 1.3 香菇菌株鉴定方法
• 1.3.1 形态学鉴定
• 1.3.2 交配型因子分析
• 1.3.3 拮抗分析
• 1.3.4 荧光染色分析
• 1.3.5 同工酶分析
• 1.3.6 分子生物学技术
• 1.4. 杂种子代的筛选
• 1.4.1 菌丝生长情况及酶活比较
• 1.4.2 农艺性状观察
• 1.4.3 分子标记技术
• 1.5 研究的目的与意义
• 2 材料与方法
• 2.1 试验材料
• 2.1.1 供试香菇菌株
• 2.1.2 主要仪器与设备
• 2.1.3 供试培养基
• 2.1.4 供试试剂
• 2.2 试验方法
• 2.2.1 单孢分离
• 2.2.2 原生质体单核化及其再生
• 2.2.3 杂交配对
• 2.2.4 拮抗实验
• 2.2.5 菌丝体生长速度测定
• 2.2.6 漆酶活性测定
• 2.2.7 PCR分析
• 2.2.8 出菇试验
• 2.2.9 相关数据统计与分析
• 3 结果与分析
• 3.1 单单杂交及单双杂交配对
• 3.2 杂交菌株菌丝体生长速度测定
• 3.2.1 麦芽浸粉培养基菌丝体生长速度测定
• 3.2.2 试管装木屑培养基菌丝体生长速度测定
• 3.2.3 原种袋装木屑培养基菌丝体生长速度测定
• 3.3 杂交菌株漆酶活性测定
• 3.4 菌丝体生长速度及漆酶活性的遗传及相关性分析
• 3.4.1 遗传效应方差分量比率估算及广义遗传率
• 3.4.2 供试菌种间的遗传变异分析
• 3.4.3 性状之间的相关分析
• 3.5 秋季品比试验
• 3.5.1 秋栽杂交菌株主要农艺性状描述
• 3.5.2 用灰色关联度分析法进行综合评价
• 3.6 W1和SHL12及其杂交菌株的IRAP分析
• 3.6.1 引物筛选结果
• 3.6.2 IRAP-PCR分析
• 3.7 亲本菌株遗传距离与杂交子综合性状的相关性评价
• 3.7.1 PCR扩增
• 3.7.2 聚类分析
• 3.7.3 供试亲本间遗传距离与8主要农艺性状值间的相关分析
• 4 讨论
• 4.1 菌丝生长速度与菌株产量的关系
• 4.2 亲本菌株遗传距离与杂交子综合性状的相关性评价
• 4.3 IRAP标记在香菇优良杂交菌株筛选中的运用
• 4.4 食用菌育种中栽培模式的探索
• 4.5 漆酶活性与菌丝吃料能力相关性分析
• 参考文献
• 致谢
• 附录