西藏林芝地区疟原虫虫种分子生物学鉴定

论文摘要

目的鉴定西藏林芝地区疟原虫虫种并计算当地居民带虫率,分析其疟区性质以及疟疾流行程度;检测林芝地区间日疟原虫裂殖子表面蛋白1基因（PνMSP-1）和环子孢子蛋白基因（PνCSP）的多态性,揭示当地间日疟原虫主要分子标志特点,为科学制定疟疾防治策略和措施提供有关依据和基线数据。方法（1）整理收集于2006年林芝地区背崩乡居民滤纸干血滴,经Chelex-100煮沸法提取其DNA,采用多重PCR方法对样本DNA进行鉴定。对检测为阳性的样本,再采用套式PCR方法作鉴定验证;（2）计算居民带虫率;（3）采用Chelex-100煮沸方法提取收集于2007年的林芝地区间日疟患者滤纸干血滴DNA和安徽怀远间日疟患者的滤纸干血滴DNA;（4）以PνMSP-1和PνCsp的特异性引物,分别对上述鉴定为间日疟原虫阳性的样本进行套式PCR扩增,并对扩增产物测序;（5）将PνMSP-1和PνCSP的测序结果在GeBank数据库中作blastn和blastx比对,建立N-J进化树,并将林芝地区PνMSP-1基因型构成比与国内数据作Fisher’s确切统计。结果（1）共整理得林芝地区背崩乡居民滤纸干血滴388份,检测出3份间日疟原虫感染样本,计算得背崩乡居民带虫率为0.77%;（2）收集到林芝地区间日疟患者滤纸干血滴35份和安徽怀远间日疟患者滤纸干血滴1份;（3）对上述39份间日疟原虫DNA作PνMSP-1和PνCSP特异性扩增,其中PνMSP-1的DNA序列在N-J进化树中聚为A（Sal-1类）、B、C和D（Belem类）四类,四类序列分别翻译为氨基酸后经比对后分为3组,A、B类对应Sal-1型,C类对应第三型（ⅡPR型）,D类对应Belem型;各组的构成比与云南、海南和安徽三省的构成比例存在明显差异（Fisher统计P值分别为:0.0163,0.1752和0.0037）;林芝地区PνCSP序列在N-J进化树中聚为一类,其翻译的氨基酸序列均与VK210株高度相似。结论（1）林芝地区的阳性滤纸干血滴均为间日疟原虫感染样本,未发现恶性疟原虫感染或恶性疟原虫和间日疟原虫混合感染样本。说明间日疟原虫为当地的优势虫种,但是否判断间日疟原虫为当地的唯一流行虫种及其流行程度仍需要长期监测以下结论。（2）本研究首次系统分析了林芝地区间日疟原虫PνMSP-1和PνCSP基因多态性,对当地间日疟原虫进行分子水平上的分类,为疟疾防治工作提供有力的分子生物学数据。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 前言
• 1. 研究背景
• 2. 研究目标与意义
• 3. 技术路线
• 第一部分 西藏林芝疟原虫虫种的PCR鉴定
• 1. 前言
• 2. 实验材料
• 3. 实验方法
• 4. 结果
• 5. 讨论
• 第二部分 林芝地区间日疟原虫MSP-1和CSP多态性研究
• 1. 前言
• 2. 实验材料
• 3. 实验方法
• 4. 结果
• 5. 讨论
• 小结
• 参考文献
• 致谢
• 在研究生期间发表的文章
• 附件